产品介绍

      在血管损伤部位产生、分泌或暴露生物活性分子，如凝血酶、ADP、胶原、纤维蛋白原和血小板反应蛋白。这些刺激激活血小板，将主要的血小板整合素αIIbbeta3从静息状态转化为活性构象，这一过程被称为整合素启动或“由内而外的信号传导”。整合素活化是指增强配体结合活性所需的变化。活化的αIIbbeta3与纤维蛋白原相互作用，并将血小板聚集在一起形成血小板塞。与纤维蛋白结合的AlphaIIbbeta3产生更多的细胞内信号（外-内信号），引起进一步的血小板活化和血小板栓回缩。在静止状态下，α和β尾巴靠得很近。这种相互作用使膜近端区域保持弯曲构象，使αIIbbeta3保持低亲和力状态。整合素αIIbbeta3通过与血小板的相互作用从其非活性状态释放，将主要的血小板整合素αIIbbleta3从静息状态转化为活性构象，这一过程被称为整合素启动或“由内而外信号传导”。整合素活化是指增强配体结合活性所需的变化。活化的αIIbbeta3与纤维蛋白原相互作用，并将血小板聚集在一起形成血小板塞。与纤维蛋白结合的AlphaIIbbeta3产生更多的细胞内信号（外-内信号），引起进一步的血小板活化和血小板栓回缩。在静止状态下，α和β尾巴靠得很近。这种相互作用使膜近端区域保持弯曲构象，使αIIbbeta3保持低亲和力状态。整合素αIIbbeta3通过与蛋白talin的相互作用而从其非活性状态释放。Talin与β3细胞质结构域相互作用，破坏α链和β链之间的盐桥。细胞质区域的这种分离触发了细胞外结构域的构象变化，从而增加了其对纤维蛋白原的亲和力。talin的大部分存在于无活性的胞浆池中，Rap1相互作用衔接分子（RIAM）参与talin的激活和向β3整合素细胞质结构域的易位。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Integrin Signaling PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0208-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ADAMTS1

COL14A1

COL7A1

FN1

ITGA4

ITGAM

ITGB6

LAMC1

MMP16

SELE

THBS1

Talin

B

ADAMTS13

COL15A1

COL8A1

HAS1

ITGA5

ITGAV

ITGB7

MMP1

MMP2

SELL

THBS2

Tensin

C

ADAMTS8

COL16A1

CTGF

ICAM1

ITGA6

ITGAX

ITGB8

MMP10

MMP3

SELP

THBS3

LAMB3

D

CD44

COL1A1

CTNNA1

ITGA1

ITGA7

ITGB1

LAMA1

MMP11

MMP7

SGCE

TIMP1

MMP15

E

CDH1

COL4A2

CTNNB1

ITGA10

ITGA8

ITGB2

LAMA2

MMP12

MMP8

SPARC

TIMP2

PECAM1

F

CNTN1

COL5A1

CTNND1

ITGA11

ITGA9

ITGB3

LAMA3

MMP13

MMP9

SPG7

TNC

TGFBI

G

COL11A1

COL6A1

CTNND2

ITGA2

ITGAD

ITGB4

LAMB1

MMP14

NCAM1

SPP1

VCAM1

VCAN

H

COL12A1

COL6A2

ECM1

ITGA3

ITGAL

ITGB5

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.