产品介绍：

       白血病一词涵盖了一系列被称为血液肿瘤的疾病，但主要是指以白细胞异常增加为特征的血液或骨髓癌。白血病的临床和病理亚型决定了其发病（急性或慢性）和受影响的血细胞类型（淋巴细胞性/淋巴细胞性或髓样/髓性）。白血病影响负责正常血细胞功能的分子和生物途径，包括炎症和免疫反应、JAK-STAT信号传导以及淋巴细胞和髓细胞的发育和分化。此外，白血病中常见的染色体易位BCR-ABL融合基因过度刺激ABL信号。受影响细胞与淋巴细胞和红细胞的分化导致了白血病干细胞的概念，加强了其调节转录因子的重要性。该阵列代表了这些通路中的许多基因，以及从这些相同通路的分子分析中得出的一些常见白血病治疗靶点。该阵列还包括解除调控的基因在白血病样本的分子分析和高通量微阵列分析研究中常规检测，以及已知在白血病中具有差异甲基化启动子的基因。监测这些基因的表达可能有助于更好地了解白血病背后的分子机制。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Leukemia PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0083-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Abl1

Bcr

Cdh13

Csf3

Fgr

Hic1

Il4

Mcl1

Pml

Runx2

Socs1

Tp53

B

Akt1

Bmpr1b

Cdkn1a

Ctgf

Foxo3

Hsp90aa1

Il6

Meis1

Prkca

Runx3

Stat1

Wif1

C

Akt2

Btg3

Cdkn1b

Ctnnb1

Frap1

Ifna1

Jak2

Mertk

Prkcb

Sfpi1

Stat3

Lyl1

D

Akt3

Cadm1

Cdkn1c

Cxcl10

Gas2l3

Ikzf3

Jun

Mlh1

Prkcq

Sfrp2

Stat5a

Nr4a3

E

Alox5

Ccl3

Cdkn2a

Dapk1

Gata1

Il10

Junb

Mn1

Pten

Sfrp4

Stat5b

Runx1

F

Apaf1

Cd34

Cdkn2b

Dkk3

Grb2

Il12a

Lmo1

Nfkb1

Rac2

Sfrp5

Tal1

Smo

G

Baalc

Cdc42ep3

Cdkn2c

Dlc1

Hck

Il15

Lmo2

Npm1

Rgs12

Shc1

Tlx1

Tlx3

H

Bcl2

Cdh1

Cebpb

Egr3

Hdac1

Il1r1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）	相关基因
差异甲基化启动子	Apaf1,Cadm1,Cdh1,Cdh13,Cdkn1a ,Cdkn1b ,Cdkn1c,Cdkn2b,Dapk1,Dkk3,Dlc1,Egr3,Hic1,Junb,Meis1,Mlh1,Npm1,Pten,Sfrp2,Sfrp4,Sfrp5,Socs1,Tp53,Wif1
BCR-ABL通路	Abl1,Bcr,Grb2,Jak2,Shc1,Stat3,Stat5a,Stat5b
JAK/STAT信号	Akt1,Csf3 ,Ifna1,Il10,Il12a,Il4,Il6,Jak2,Socs1,Stat1,Stat3,Stat5a,Stat5b
造血	Bcl2,Csf3 ,Ctnnb1,Il10,Il4,Jak2,Lmo2,Pml,Runx1,Stat5a,Stat5b,Tal1,Tp53
骨髓细胞分化	Ctnnb1,Foxo3,Il4,Jun,Lmo2,Runx1 ,Spi1,Stat5a,Stat5b,Tal1
免疫系统发育	Bcl2,Csf3 ,Ctnnb1,Il10,Il4,Jak2,Lmo2,Mlh1,Pml,Runx1,Stat5a,Stat5b,Tal1,Tlx1,Tp53
淋巴细胞增殖与分化	Bcl2,Csf3,Ctnnb1,Il10,Il12a,Il4,Il6,Stat5a,Stat5b
细胞因子和趋化因子	Ccl3,Csf3,Cxcl10,Ifna1,Il10,Il12a,Il15,Il1r1,Il4,Il6
恶性肿瘤	Baalc,Bmpr1b,Btg3,Ccn2,Cd34,Cdc42ep3,Gas2l3,Mn1,Nr4a3 ,Rgs12
白血病治疗靶点	Akt1,Alox5,Bcl2,Ctnnb1,Fgr,Foxo3,Hck,Hdac1,Hsp90aa1,Ifna1,Jak2,Mcl1,Mertk,Pml,Prkcb,Rac2,Smo
白血病干细胞转录调节因子	Cebpb,Gata1,Ikzf3,Jun,Lmo1,Lmo2,Lyl1,Meis1,Nfkb1,Runx1,Runx2,Runx3,Spi1,Stat1,Stat3,Stat5a,Tal1,Tlx1,Tlx3

白血病通路图：


图片来源于：https://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?map05221

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。
    WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.