产品介绍：

       胆固醇是哺乳动物细胞膜的重要成分，也是胆汁酸、维生素D和类固醇激素的前体。人体胆固醇稳态受肠道摄取、内源性合成、脂蛋白颗粒运输和胆汁排泄等平衡机制的调节。其代谢异常可导致各种内分泌紊乱和心血管疾病的风险增加。胆固醇在全身合成，但主要在肝脏、肠道、肾上腺和生殖器官中合成。合成从乙酰辅酶A和乙酰乙酰辅酶A的组合开始。甲羟戊酸是合成胆固醇的重要中介。

       WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Lipoprotein Signaling & Cholesterol Metabolism PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0088-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Abca1

Apoa2

Arv1

Cyb5r3

Dhcr7

Hmgcs2

Ldlr

Lrp1b

Nr0b2

Ppard

Soat2

Trerf1

B

Abca2

Apoa4

Cdh13

Cyp11a1

Ebp

Idi1

Ldlrap1

Lrp6

Nr1h4

Prkaa1

Sorl1

Vldlr

C

Abcg1

Apob

Cel

Cyp39a1

Fdft1

Idi2

Lep

Lrpap1

Nsdhl

Prkaa2

Srebf1

Lrp12

D

Acaa2

Apoc3

Cela3b

Cyp46a1

Fdps

Il4

Lepr

Mbtps1

Olr1

Prkag2

Srebf2

Npc1l1

E

Akr1d1

Apod

Cnbp

Cyp51

Fdx1

Insig1

Lipe

Mttp

Osbpl1a

Scap

Stab1

Pmvk

F

Angptl3

Apoe

Colec12

Cyp7a1

Hdlbp

Insig2

Lrp10

Mvd

Osbpl5

Scarf1

Stab2

Soat1

G

Ankra2

Apof

Crp

Cyp7b1

Hmgcr

Lbr

Lrp11

Mvk

Pcsk9

Snx17

Stard3

Tm7sf2

H

Apoa1

Apol8

Cxcl16

Dhcr24

Hmgcs1

Lcat

Actb

Gapdh

Hprt1

B2m

NTC

NTC

 

基因分类（Mouse）	相关基因
低密度脂蛋白受体	Cxcl16、Ldlr、Lrp10、Lrp12、Lrp1b、Lrp6、Olr1、Stab1、Stab2、Vldlr
低密度脂蛋白相关蛋白	低密度脂蛋白受体相关蛋白Lrpap1、Pcsk9、Snx17。低密度脂蛋白相关蛋白Ankra2，Apoa4，Cdh13，Colec12， Crp，Scarf1，Sorl1
高密度脂蛋白相关蛋白	Apoa1，Apod，Apof
胆固醇转运蛋白	Abca1、Abcg1、Apoa1、Apoe、Stard3
胆固醇流出	Abca1、Abcg1、Apoa1、Apoa4、Apoe
反向胆固醇转运	Abca1、Apoa1、Apoa2、Apoa4、Apoe、Lcat
其他胆固醇转运基因	Apob、Ldlr、Npc1l1、Osbpl5
胆固醇分解代谢	Akr1d1、Apoe、Cel、Cyp39a1、Cyp46a1、Cyp7a1、Scarf1、Snx17、Trerf1
胆固醇稳态	Abca1、Abcg1、Angptl3、Apoa1、Apoa2、Apoa4、Apoe、Lcat、Ldlr、Ldlrap1、Pcsk9
胆固醇生物合成	Acaa2、Cnbp、Cyb5r3、Cyp51、Dhcr24、Dhcr7、Ebp、Fdft1、Fdps、Hmgcr、Hmgcs1、Hmgcs2、Idi1、 Idi2、Mvd、Mvk、Npc1l1、Nsdhl、Pmvk、Prkaa1、Prkaa2、Prkag2、Tm7sf2
其他胆固醇代谢基因	Abca2、Apob、Apoc3、Apof、Apol8、Cela3b、Cyp11a1、Cyp7b1、Hdlbp、Il4、Insig1、Insig2、Lep、Lipe、 Mbtps1、Nr0b2、Nr1h4、Osbpl1a、Osbpl5、Ppard、Scap、Soat1、Soat2、Sorl1、Srebf1、Srebf2、Stard3、

脂蛋白信号转导与胆固醇代谢通路图

 

图片来源于：https://www.kegg.jp/entry/map04979

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.