产品介绍：

       肝细胞癌（HCC）是一种主要的原发性肝癌，也是一种罕见的与病毒因子相关的人类肿瘤。研究表明，在HBV/HCV感染和酒精或黄曲霉毒素B1暴露后，会发生遗传和表观遗传学变化。发现复发突变基因在多个关键驱动信号过程中高度富集，包括端粒维持、TP53、细胞周期调节、Wnt/β连环蛋白途径（CTNNB1和AXIN1）、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/AKT/雷帕霉素哺乳动物靶点（mTOR）途径。

       WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Liver Cancer PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0087-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

 基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ADAM17

BID

CDH13

CXCR4

FAS

HRAS

MAPK1

NRAS

PYCARD

SMAD4

TGFB1

XIAP

B

AKT1

BIRC2

CDK4

DAB2IP

FHIT

IGF2

MCL1

NRF2

RAC1

SMAD7

TGFBR1

YAP1

C

ANGPT2

BIRC5

CDKN1A

DLC1

FLT1

IGFBP1

MET

OPCML

RASSF1

SOCS1

TGFBR2

NFKB1

D

APC

CASP8

CDKN1B

E2F1

FZD7

IGFBP3

MSH2

PDGFRA

RB1

SOCS3

TLR4

PTK2

E

AXIN1

CCL5

CDKN2A

EGF

GADD45B

IRS1

MSH3

PIN1

RELN

STAT3

TNFRSF10B

SFRP2

F

BAX

CCND1

CDKN2B

EGFR

GSTP1

ITGB1

MTDH

PTEN

RHOA

TCF4

TNFSF10

TGFA

G

BCL2

CCND2

CFLAR

EP300

HGF

KDR

MYC

PTGS2

RUNX3

TERT

TP53

WT1

H

BCL2L1

CDH1

CTNNB1

FADD

HHIP

LEF1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

基因分类（Human）	相关基因
肝细胞癌上调	BCL2,BIRC5,CCND1,CFLAR,FZD7,IGF2,IRS1,LEF1,MCL1,MET,NFKB1,PIN1,PTK2,RAC1,RHOA,SMAD7,STAT3,TCF4,TGFA,TGFB1,TNFSF10 ,XIAP
在肝细胞癌中下调	BAX,BID,CASP8,CDKN1A ,CDKN2A,DLC1,FADD,FAS,HHIP,IGFBP1,IGFBP3,ITGB1,PTEN,RB1,SMAD4,SOCS1,SOCS3,TGFBR2,TNFRSF10B
经典wnt信号	CCND1,CDKN2A,CTNNB1,FZD7,LEF1,MTDH,PIN1,RB1,SFRP2,TCF4
TGFβ 信号	SMAD4 ,SMAD7,TGFB1,TGFBR2
AKT & PI3 激酶信号	AKT1,IRS1,PTEN
IGF / IGFR 信号	IGF2,IGFBP1,IGFBP3,IRS1
Hippo 信号	YAP1.
RAS / RAF / MAP 激酶信号	CDKN1A ,CDKN2A,DLC1,HRAS,NRAS,RAC1,RASSF1,RB1,RHOA,TP53
EGFR 信号	ADAM17,CDH13,EGF,EGFR,TGFA,TGFB1
MET / HGF 信号	HGF,MET
G-Protein 信号	CDH13,CDKN1A ,CDKN2A ,DAB2IP,DLC1,HRAS,NRAS,RAC1,RASSF1,RB1,RELN,RHOA,TP53
上皮-间质转化	CTNNB1,HGF,LEF1,SMAD4 ,SMAD7,TGFB1.
细胞周期	BIRC5,CCND1,CCND2,CDKN1A ,CDKN1B,CDKN2A ,E2F1,EP300,GADD45B,IGF2,MYC,PTEN,RASSF1,RUNX3
细胞凋亡	BAX,BCL2,BCL2L1 ,BID,BIRC2 ,BIRC5,CASP8,CFLAR,DLC1,E2F1,EP300,FADD,FAS,FHIT,GADD45B,GSTP1,MCL1,MSH2,PYCARD,RUNX3,SOCS3,TERT,TNFRSF10B,TNFSF10,WT1
免疫和炎症反应	CCL5 ,CXCR4,NFKB1,PTGS2,RAC1,TGFB1,TLR4
细胞外基质（ECM）和细胞粘附分子	ADAM17,AKT1,CDH1,CDH13,CFLAR ,DLC1,EGFR,EP300,HGF,ITGB1,LEF1,OPCML,PTEN,PYCARD ,RAC1,RELN,RHOA,SMAD7,SOCS1,SOCS3,TGFB1
血管生成	ANGPT2,CASP8,CDH13,CTNNB1,EGF,FLT1,KDR ,PDGFRA,PTEN,PTK2 ,TGFBR2
DNA损伤与修复	CCND1,CDKN1A,MSH2,MSH3,TP53 ,XIAP

肝癌通路图

  

图片来源于：https://www.kegg.jp/pathway/map05225

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.