产品介绍：

大多数肺癌病例来自吸烟，但也暴露于其他环境危害，如被动吸烟，氡气，石棉和病毒感染。吸烟史，非小细胞肺癌（NSCLC）患者肺癌的主要亚型包括源自外周肺组织的腺癌（AC）和源自中央支气管的鳞状细胞癌（SCC）。虽然肺癌背后的确切分子机制仍在深入研究中，但肿瘤抑制基因抑制和癌基因激活起着重要作用。受影响的肿瘤抑制因子和癌基因调节免疫应答，细胞凋亡，细胞周期，PI3K/AKT和细胞粘附途径。针对这些在肺癌亚型与正常组织中差异表达的途径和基因的研究可能会深入了解肺癌发生背后的分子机制。该阵列包括在肺癌样品的分子分析中常规检测并通过高通量微阵列分析研究发现的基因，以及已知在肺癌中具有差异甲基化启动子的基因。肺癌倾向于转移；因此，该阵列包括与转移潜能相关的基因。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Lung Cancer PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0091-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AGER

BRAF

CDKN2B

CSF3

DUSP6

GREM1

LCK

MMP12

Pik3ca

SFRP1

STAT2

VEGFA

B

AGR2

CA4

CEACAM5

CXCL12

EGFR

HGF

LGSN

MMP9

PRDM2

SFTA3

TCF21

WIF1

C

AKT1

CADM1

CEACAM6

CXCL13

ERBB2

HMMR

MET

MTHFR

Prkn

SFTPC

TERT

MMP1

D

ANXA5

CDH1

CLCA2

CYP1B1

ERBB3

HRAS

MGMT

NF1

PTGS2

SOSTDC1

TGFB1

PAX5

E

APBA1

CDH13

CLDN18

Cyp2a4

Ercc6

IRF4

MKI67

NFKB1

RASSF1

SPINK1

TNF

SCGB1A1

F

APC

Cdkn1a

CLIC5

Cyp2a5

FABP4

KRAS

MLH1

NKX2-1

RASSF2

SPP1

TOP2A

STAT1

G

BCL2

CDKN1C

COL11A1

DLC1

FHIT

KRT14

MMD

OPCML

RB1

SPRR1A

TOX3

TP53

H

BIRC5

CDKN2A

CP

DSG3

GPM6A

KRT5

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Human）		相关基因
差异甲基化启动子		APBA1,APC,CADM1,CDH1,CDH13,CDKN1C,CDKN2A,CDKN2B ,CXCL12,CYP1B1,DLC1,FHIT, MGMT,MLH1,MTHFR,OPCML,PRDM2 ,RASSF1,RASSF2,SFRP1,TCF21.
转移潜能		ANXA5,DUSP6,ERBB3,HGF,HMMR,IRF4,LCK,MET,MMD,NF1,STAT1,STAT2.
腺癌（AC）与鳞状细胞癌（SCC）中差异表达的基因	腺癌高于鳞状细胞癌	CLCA2,DSG3,KRT14,KRT5,SPRR1A.
	鳞状细胞癌高于腺癌	AGR2,LGSN,NKX2-1,SFTA3,SPINK1
肺癌上调		CEACAM5,COL11A1,CP,CXCL13,GREM1,MKI67,MMP1,MMP12,SPINK1,SPP1,TOP2A,TOX3
肺癌下调		AGER,CA4,CLDN18,CLIC5,FABP4,GPM6A,SCGB1A1,SFTPC,SOSTDC1,WIF1
AKT和PI3激酶信号		AKT1,BCL2,CDH1,CDKN2A,EGFR ,NFKB1,TP53,VEGFA.
细胞凋亡		ANXA5,APC,BCL2,BIRC5,BRAF,CADM1,CDH1,CDH13,CDKN2A,DLC1,EGFR,ERBB2,ERBB3,HGF,HRAS,KRAS, LCK,MLH1,MMP9,NF1,NFKB1,PTGS2,SFRP1,STAT1,TERT,TGFB1,TNF,TOP2A,TP53,VEGFA.
细胞周期的调节		APC,BCL2,BIRC5,CDKN1C,CDKN2A,CDKN2B ,EGFR,PTGS2,RB1,TGFB1,TNF,TP53.
免疫反应		BCL2,CADM1,CSF3,CXCL12,CXCL13,IRF4,LCK,MLH1,MMD,NFKB1,PAX5,STAT1,STAT2,TGFB1,TNF,TP53,VEGFA
细胞外基质（ECM）和细胞粘附分子		CADM1,CDH1,CDH13,CEACAM6,CLDN18,COL11A1,DSG3,GPM6A,HMMR,KRT14,KRT5,MET,MMP1,MMP12, MMP9,SFTA3,SFTPC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.