产品介绍：

       丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 级联是一个高度保守的模块，参与各种细胞功能，包括细胞增殖、分化和迁移。 哺乳动物表达至少四个明显调节的 MAPK 组、细胞外信号相关激酶 (ERK)-1/2、Jun 氨基末端激酶 (JNK1/2/3)、p38 蛋白 (p38alpha/beta/gamma/delta) 和 ERK5 ，由特定MAPKK 激活：MEK1/2 用于 ERK1/2，MKK3/6 用于 p38，MKK4/7 (JNKK1/2) 用于 JNK，MEK5 用于 ERK5。 然而，每个 MAPKK 可以被多个 MAPKKK 激活，从而增加了 MAPK 信号的复杂性和多样性。 大概每个 MAPKKK 都会对不同的刺激产生反应。 例如，生长因子对 ERK1/2 的激活取决于 MAPKKK c-Raf，但其他 MAPKKKs 可能会激活 ERK1/2 以响应促炎刺激。

       沃吉基因MAPK信号通路PCR阵列包含由MAP激酶信号相关基因及MAP激酶信号诱导表达的转录因子及 Raf 调节蛋白和 MEKK1 相互作用蛋白以及由 Erk1/2 途径调节的细胞周期蛋白等关键90个基因。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	MAP Kinase Signaling Pathway PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	wc-mRNA0092-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Araf

Atf2

Ccna1

Ccna2

Ccnb1

Ccnb2

Ccnd1

Ccnd2

Ccnd3

Ccne1

Cdc42

Cdk2

B

Cdk4

Cdk6

Cdkn1a

Cdkn1b

Cdkn1c

Cdkn2a

Cdkn2b

Cdkn2c

Chuk

Col1a1

Creb1

Crebbp

C

Dlk1

Dusp2

Dusp4

Dusp5

Dusp6

E2f1

Egfr

Egr1

Ets1

Ets2

Fos

Grb2

D

Hspa5

Hspb1

Jun

Kcnh8

Kcnn1

Kras

Ksr1

Map2k1

Map2k2

Map2k4

Map2k5

Map2k6

E

Map2k7

Map3k1

Map3k2

Map3k3

Map3k4

Map3k5

Map3k8

Map3k9

Map4k1

Mapk1

Mapk10

Mapk11

F

Mapk12

Mapk13

Mapk14

Mapk3

Mapk6

Mapk7

Mapk8

Mapk8ip1

Mapk8ip2

Mapk8ip3

Mapk9

Mapkapk2

G

Mapkapk5

Max

Mef2c

Mknk1

Mos

Myc

Nfatc4

Nras

Pak1

Pak2

Pak3

Rac1

H

Raf1

Rb1

Sfn

Smad4

Tbp

Tp53

Actb

Gapdh

Hprt1

Ubb

NTC

NTC

基因分类（rat）	相关基因
MAP激酶信号	Araf,Dlk1,Map2k1 ,Map2k2 ,Map2k4 ,Map2k5 ,Map2k6 ,Map2k7 ,Map3k1 ,Map3k2 ,Map3k3 ,Map3k4 , Map3k5,Map4k1 ,Mapk1 ,Mapk10 ,Mapk11 ,Mapk12 ,Mapk13,Mapk14 ,Mapk3 ,Mapk6 ,Mapk7 ,Mapk8 ,Mapk9, Mos,Pak1,Pak2,Pak3,Raf1.
活化转录因子	Atf2 ,Creb1,Crebbp ,Egfr,Ets1,Ets2,Jun,Kcnh8,Kcnn1 ,Mapkapk2,Mapkapk5,Max,Mef2c,Mknk1,Myc,Nfatc4 , Smad4,Tp53,Tbp
由 MAP 激酶信号诱导	Col1a1,Egr1,Fos,Hspa5 ,Hspb1 ,Jun,Myc,Tp53 .
Raf 调节蛋白	Cdc42,Chuk ,Grb2,Kcnn1 ,Kras,Ksr1,Map2k1 ,Map2k2 ,Map2k4 ,Map4k1 ,Nras,Rac1,Sfn .
支架与锚定蛋白	Map3k1 ,Mapk8ip1 ,Mapk8ip2,Mapk8ip3 .
ERK1/2 信号调节的细胞周期蛋白	Ccna1,Ccna2,Ccnb1,Ccnb2,Ccnd1,Ccnd2,Ccnd3,Ccne1,Cdk2,Cdk4,Cdk6,Cdkn1a ,Cdkn1b ,Cdkn1c ,Cdkn2a , Cdkn2b ,Cdkn2c ,E2f1,Rb1,Dusp2,Dusp4.

MAPK Signaling Pathway 通路图

图片来源于：https://www.genome.jp/pathway/map04010

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.