产品介绍：

在精子发生过程中，原代精子细胞经历减数分裂，最终分裂并形成成熟的精子（精子细胞）。尽管精子在转录上是无活性的，但每个精子细胞都含有mRNA转录物。最初，这些mRNA转录物被认为最初由初级精子细胞表达，因此是生精过程的非生物学相关副产物。然而，最近的研究已经鉴定出在不育男性的精子中差异检测到的mRNA。一种假设认为受精和胚胎发生的初始阶段需要精子来源的mRNA。例如，印迹基因的表观遗传调控发生在胚胎发生过程中，表达染色质修饰酶和重塑因子的精子来源的mRNA可能是完成该过程所必需的。精子来源的mRNA也在睾丸中表达。因此，与睾丸活检不同，精子mRNA的分析可能为研究男性不育症提供了一种侵入性较小的方法。该阵列包括在可育和不育男性的精子中差异检测的基因。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Male Infertility PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0093-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Acsbg2

Boll

Cdo1

Cul3

Eif2b4

Gpr64

INHBA

Ndufs7

Piwil1

Sod1

Tcp11

Wapal

B

Adcy10

Brd2

CLDN1

Cyp19a1

Eif4g3

Gpx1

Klhl10

Nfkbia

Plcz1

Sod2

Tex11

Zp3

C

Ahr

Brdt

CLDN10

Dazl

Fas

Hdac1

Lama5

Npc2

Prdx3

Spo11

Tnp1

Mllt3

D

Akap14

Carhsp1

CLDN11

Ddx25

Fbxo5

Hmox1

Lep

Odf1

Prm2

Spz1

Trim36

Pgk2

E

Akap4

Catsper1

Creb1

Ddx4

Fos

Hsd17b7

Lhcgr

Park7

Serpina5

Srpk1

Trpd52l3

Smarca2

F

Amh

Catsper4

Crem

Dmrt1

GJA1

Hsf2

Lmna

Pcsk4

Slc25a5

Stag3

Tsga10

Tbp

G

Apob

Ccnb1

Crisp2

Dnajb8

GJB1

Hspa4l

Mcm8

Pdzd8

Slc26a8

Sycp3

Ubap2

Uchl1

H

Ar

Cd46

Crisp4

Dnajc28

Gli3

Il16

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Mouse）		相关基因
精子发生		Acsbg2,Adcy10,Adgrg2,Akap14,Apob,Boll,Brd2,Catsper1,Catsper4,Ccnb1,Crem,Crisp2,Dazl,Ddx25,Fas,Hsf2,Klhl10,Lhcgr,Lmna,Odf1,Pcsk4,Piwil1,Prm2,Serpina5,Slc26a8,Sod1,Spo11,Spz1,Srpk1,Sycp3,Tbp,Tcp11,Tnp1,Trpd52l3,Tsga10.
受精作用		Akap4,Apob,Cd46,Crisp4,Klhl10,Park7,Pcsk4,Plcz1,Serpina5,Tnp1,Trim36,Zp3.
男性性别分化		Amh,Ar,Cyp19a1,Dmrt1,Klhl10,Lhcgr,Pdzd8.
细胞运动		Akap4,Catsper1,Cul3,Ddx4,Gli3,Gpx1,Il16,Lama5,Lep,Lmna,Tnp1,Zp3.
细胞周期	减数分裂	Boll,Fbxo5,Slc26a8,Spo11,Stag3,Tex11,Wapl
	有丝分裂	Ccnb1,Cul3,Fbxo5,Mcm8,Slc25a5,Wapl.
应激反应		Ahr,Apob,Carhsp1,Ccnb1,Cd46,Cdo1,Creb1,Cyp19a1,Dnajb8,Dnajc28,Eif2b4,Fas,Fos,Gpx1,Hdac1,Hmox1,Hsf2,Hspa4l,Lep,Lmna,Park7,Prdx3,Sod1,Sod2,Srpk1,Tnp1,Uchl1,Zp3.
染色质修饰酶和重塑因子		Brdt,Ccnb1,Hdac1,Mllt3,Smarca2,Sycp3,Tnp1
其他男性不育基因		Eif4g3,Hsd17b7,Ndufs7,Nfkbia,Npc2,Pgk2,Srpk1,Ubap2.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.