产品介绍：

      黑色素瘤是一种预后不良的皮肤癌症，在西方人群中呈上升趋势。黑色素瘤是由产生色素的细胞，即黑色素细胞的恶性转化引起的。唯一已知的环境风险因素是暴露在紫外线下，皮肤白皙的人的风险大大增加。黑色素瘤的发病机制也是由遗传因素驱动的。致癌NRAS突变激活效应通路Raf-MEK-ERK和PI3K-Akt。Raf-MEK-ERK通路也可以通过BRAF基因的突变被激活。PI3K-Akt通路可以通过抑制性肿瘤抑制基因PTEN的缺失或突变而被激活。这些突变在黑色素瘤发病早期出现，并在整个肿瘤进展过程中保留下来。黑色素瘤的发展已被证明与p16INK4a/细胞周期蛋白依赖性激酶4和6/视网膜母细胞瘤蛋白（p16INK4a/CDK4，6/pRb）和p14ARF/人双分钟2/p53（p14ARF/HMD2/p53）肿瘤抑制途径的失活密切相关。MITF和TP53与黑色素瘤的进一步发展有关。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Melanoma PCR Array plate
种    属：	HUMAN
货    号：	wc-mRNA0252-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ABCC2

AKT1

AKT2

AKT3

ASXL1

BCL2

BCL2L1

BMI1

BRAF

BRCA2

BRN2

CDH1

B

CDKN1A

CDKN2A

CHP2

COL11A1

CSPG4

CTGF

CTNNB1

CXCR4

CYR61

DNAJA1

DTX3L

EDNRB

C

EGFR

ERCC2

FABP7

FGF13

FGFR2

FGFR3

FOXD1

FOXD3

GAPDHS

GNAQ

GRM1

HOXB7

D

HRAS

IGF1

IGFBP3

ISG15

ITGA4

ITGA6

ITGA7

ITGB3

KIT

KRAS

LIF

MAPK14

E

MAPK3

MC1R

MCAM

MITF

MLANA

MX1

NOTCH2

NPM2

NRAS

OAS1

OPN（SPP1）

PAX3

F

PIK3CA

PIK3CB

PIK3CD

PLA1A

PMEL

PPP2R2C

PTEN

PTPRF

Rab5b

RB1

RNF128

RPS6KA1

G

RUNX3

SHC4

SHOX2

SNAI1

SNAI2

SOS1

SOX10

STK11

TIMP3

TM4SF1

TM4SF13

TMEM229B

H

TNC

TP53

TPD52

TYRP1

UCHL1

WNT4

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

黑色素瘤通路图：

           图片来源于：https://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?map05218

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.