产品介绍

路径描述

      在哺乳动物中，昼夜节律系统由三个主要组成部分组成：侧眼、下丘脑SCN（视上核）和松果体。SCN含有内源性振荡器，该振荡器每天通过视网膜输入被携带到环境光照条件下。在由SCN输出驱动的体内许多昼夜节律中，松果体中褪黑激素（N-乙酰基-5甲氧基色氨酸）的合成起着编码黑暗持续时间的激素信息的作用。褪黑激素是一种主要由松果体或骨骺分泌的激素；它也是由视网膜产生的，但数量要少得多。褪黑激素是夜间产生的，是时间的神经化学表征。这种昼夜节律信息的传播依赖于褪黑素受体的激活，褪黑素受体在SCN和垂体结节部以及许多其他组织中最显著地表达。褪黑素可以通过受体或独立于受体激活或抑制信号转导级联反应。该激素在皮摩尔范围内与膜受体和/或在纳摩尔范围内以高亲和力与核受体（RZR/ROR）以及钙调素结合。在更高浓度下，褪黑素具有清除自由基的功能。褪黑素可以结合和激活多种受体亚型。膜褪黑激素受体的两种亚型是GPCR（G蛋白偶联受体）。每一种G蛋白偶联的褪黑素受体亚型，表示为：MTNR1A（褪黑素受体1A）和MTNR1B（褪黑素受体1B），可以偶联到多个信号转导级联。膜褪黑激素受体主要在中枢神经系统中表达，而RZR（类视网膜Z受体）/ROR（类视网膜孤儿受体）在外周和大脑中均显著表达。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Melatonin Signaling PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0187-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ARAF

CACNA1H

CAMK2B

GNAI1

GNB5

KCNK3

MAP2K2

MAPK8

PLCD1

PRKACG

PRKCE

RORB

B

BRAF

CACNA1S

CAMK2D

GNAI2

GNG2

KCNK4

MAP2K3

MAPK9

PLCD3

PRKAR1A

PRKCG

RORC

C

CACNA1B

CACNB2

CAMK2G

GNAI3

GNRH1

KCNK5

MAP2K4

MTNR1A

PLCD4

PRKAR1B

PRKCH

MAPK3

D

CACNA1C

CACNB4

FOS

GNAQ

GNRH2

KCNK6

MAP2K5

MTNR1B

PLCE1

PRKAR2A

PRKCI

PLCB4

E

CACNA1D

CALM1

GNA11

GNAS

JUN

KCNK9

MAP2K6

PLCB1

PLCG1

PRKAR2B

PRKCQ

PRKACB

F

CACNA1E

CALM2

GNA12

GNB1

KCNK1

KCNV2

MAPK1

PLCB2

PLCG2

PRKCA

PRKCZ

PRKCD

G

CACNA1F

CALM3

GNA13

GNB2

KCNK10

KCTD12

MAPK10

PLCB3

PRKACA

PRKCB

PRKD1

RORA

H

CACNA1G

CAMK2A

GNA15

GNB3

KCNK2

MAP2K1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.