产品介绍：

       线粒体充当细胞的能源，对于真核细胞正常生长和功能至关重要。NADH和FADH2（糖酵解和TCA循环的代谢物）通过一系列4种蛋白质复合物氧化嵌入线粒体内膜：NADH辅酶Q还原酶、琥珀酸辅酶Q还原酶、辅酶Q-细胞色素c还原酶和细胞色素c氧化酶。这些过程产生的自由能通过第五种蛋白质复合物（ATP合酶）驱动氧化磷酸化和ATP合成。这些过程的失调是癌症进展的主要病理后果。许多肿瘤含有数量减少的线粒体呼吸链成分，尽管这种抑制的确切机制尚不清楚。然而，最近的研究表明，重要的肿瘤抑制因子p53诱导COX2的表达，COX2是细胞色素c氧化酶功能的重要组成部分。线粒体功能障碍也会导致代谢综合征和肥胖，过量在哪里-氧化通过产生过量的NADH使氧化磷酸化超载。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Mitochondrial energy PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	wc-mRNA0277-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ARRDC3

ATP5F1

ATP5L

COX4I1

COX6C

EDN1

NDUFA3

NDUFB2

NDUFC1

NDUFS7

SDHA

UQCRH

B

ASB1

ATP5G1

ATP5O

COX4I2

COX7A2

GADD45B

NDUFA4

NDUFB3

NDUFC2

NDUFS8

SDHB

UQCRQ

C

ATP12A

ATP5G2

ATP6V0A2

COX5A

COX7A2L

LHPP

NDUFA5

NDUFB4

NDUFS1

NDUFV1

SDHC

NDUFB10

D

ATP4A

ATP5G3

ATP6V0D2

COX5B

COX7B

LRP5L

NDUFA6

NDUFB5

NDUFS2

NDUFV2

SDHD

NDUFB9

E

ATP4B

ATP5H

ATP6V1C2

COX6A1

COX8A

NDUFA1

NDUFA7

NDUFB6

NDUFS3

NDUFV3

UQCR11

NDUFS6

F

ATP5A1

ATP5I

ATP6V1E2

COX6A2

COX8C

NDUFA10

NDUFA8

NDUFB7

NDUFS4

OXA1L

UQCRC1

PPA2

G

ATP5B

ATP5J

ATP6V1G3

COX6B1

CYC1

NDUFA11

NDUFAB1

NDUFB8

NDUFS5

PPA1

UQCRC2

UQCRFS1

H

ATP5C1

ATP5J2

BCS1L

COX6B2

DNAJB1

NDUFA2

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

基因分类（Human）	相关基因
复合物I（NADH辅酶Q还原酶）	NDUFA1,NDUFA10,NDUFA11,NDUFA2,NDUFA3,NDUFA4,NDUFA5,NDUFA6,NDUFA8,NDUFAB1,NDUFB10,NDUFB2,NDUFB3,NDUFB4,NDUFB5,NDUFB6,NDUFB7,NDUFB8,NDUFB9,NDUFC1,NDUFC2,NDUFS1,NDUFS2,NDUFS3,NDUFS4,NDUFS5,NDUFS6,NDUFS7,NDUFS8,NDUFV1,NDUFV2,NDUFV3
复合物II（琥珀酸辅酶Q还原酶）	SDHA,SDHB,SDHC,SDHD
复合物III（辅酶Q-细胞色素c还原酶）	CYC1,UQCR11,UQCRC1,UQCRC2,UQCRFS1,UQCRH,UQCRQ.
复合物IV（细胞色素c氧化酶）	COX4I1,COX5A,COX5B,COX6A1,COX6A2,COX6B1,COX6C,COX7A2,COX7A2L,COX7B,COX8A
复合物V（ATP合酶）	ATP5F1A,ATP5F1B,ATP5F1C,ATP5MC1,ATP5MC2,ATP5MC3,ATP5ME,ATP5MF,ATP5MG,ATP5PD,ATP5PF,ATP5PO,PPA1
通路活性特征基因	ARRDC3,ASB1,DNAJB1,EDN1,GADD45B,LRP5L,

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.