产品介绍：

       线粒体是细胞的能量发电站，是真核细胞正常生长和功能所必需的。然而，氧化磷酸化过程中的有害副产物称为反应性氧化物种（ROS），导致线粒体功能障碍。如果损伤过大而无法修复，则通过称为有丝分裂吞噬的特定自噬模式选择性识别和靶向降解这些线粒体。线粒体膜电位的丧失可诱导有丝分裂吞噬，涉及激酶PINK1和E3连接酶Parkin。PINK1作为线粒体去极化的传感器，招募Parkin，然后泛素依赖性招募有丝分裂吞噬受体。也有几种PINK1/Parkin独立的有丝分裂吞噬途径，其中需要一组含有LIR的受体来响应不同的刺激。有丝分裂吞噬有助于维持健康的线粒体网络和防止程序性细胞死亡。

       WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Mitophagy PCR Array
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0284-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AKT1

BCL2L1

CITED2

FUNDC1

HUWE1

MFN1

OPTN

RHOT2

ATG4A

TOMM20

UBA52

VPS13C

B

AMBRA1

BCL2L13

CSNK2A1

GABARAP

JUN

MFN2

PGAM5

RNF41

TAX1BP1

TOMM22

UBB

VPS13D

C

ATF4

BECN1

CSNK2A2

GABARAPL1

KRAS

MITF

PHB2

RPS27A

TBC1D15

TOMM5

UBC

RELA

D

ATG13

BECN2

CSNK2B

GABARAPL2

MAP1LC3A

MRAS

PINK1

RRAS

TBC1D17

TOMM6

ULK1

SRC

E

ATG14

BNIP3

E2F1

HDAC6

MAP1LC3B

MTERFD1

PRKN

RRAS2

TBK1

TOMM7

USP15

TIGAR

F

ATG5

BNIP3L

EIF2AK3

HIF1A

MAPK10

NBR1

RAB7A

SP1

TFE3

TOMM70A

USP30

TSC2

G

ATG9A

CALCOCO2

FIS1

HRAS

MAPK8

NLRP3

RAB7B

SQSTM1

TFEB

TP53

USP8

VDAC1

H

ATG9B

CDC37

FOXO3

HTRA2

MAPK9

NRAS

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

线粒体自噬通路图

 

 图片来源于：https://www.kegg.jp/pathway/map04137

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.