产品介绍

路径描述

      心力衰竭通常与长期和不适应的心肌肥大有关，心肌肥大被定义为心脏的一种代偿机制，有助于在血流动力学负荷持续增加的病理状态下维持心输出量。由于心肌细胞在出生后不久就失去了分裂能力，心肌肥大在体内提供了一种重要的适应性反应，使生物体能够维持或增加其心输出量。成人心肌对各种内在和外在刺激做出反应，包括高血压、心肌梗死、心律失常、瓣膜病、内分泌紊乱、工作量增加、损伤以及由肥大生长引起的突变肌块蛋白引起的收缩异常。尽管最初是有益的，但长期肥大与导致扩张型心肌病、心力衰竭和猝死的不良临床预后相关。肥大反应是由生长因子和细胞因子通过几个相互依赖的信号级联反应协调的，包括特异性G蛋白亚型、低分子量GTP酶（Ras）、MAPK（有丝分裂原活化蛋白激酶）和PKC（蛋白激酶C）。此外，最近的研究已经认识到Ca2+敏感信号分子的重要性，包括钙调神经磷酸酶、钙调蛋白依赖性蛋白激酶和MAPK在肥大途径中的重要性，其中NFAT（活化T细胞的核因子）占据中心位置，是心脏肥大发展的最佳特征靶点。心肌肥大发展的初始阶段包括在细胞膜上形成心脏旁分泌和/或自分泌因子，如内皮素-1、血管紧张素II和肾上腺素激动剂：苯肾上腺素和去甲肾上腺素，其受体与G-AlphaQ/G-Alpha11、G-AlphaS和G-AlphaI家族的G蛋白偶联。通过NFATC4途径与诱导肥大相关的其他受体包括IGF1（胰岛素样生长因子-1）、GP130等。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	NFAT & Cardiac Hypertrophy PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0189-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ADCY3

CACNA1S

CREBBP

GNAI2

HDAC2

IL6

MAP2K3

MAPK12

NKX2-5

PLCG2

PRKCE

SCNN1G

B

AGT

CALM1

CSNK1A1

GNAI3

HDAC3

IL6ST

MAP2K4

MAPK13

NRAS

PPP3CA

PRKCZ

SOS1

C

AKAP5

CALM2

EDN1

GNAQ

HDAC4

ITPR1

MAP2K6

MAPK14

PIK3CA

PRKACA

RAF1

MAPK10

D

AKT1

CALM3

ELSPBP1

GNAS

HDAC6

ITPR3

MAP3K1

MAPK3

PIK3CD

PRKAR1A

RCAN1

NFATC4

E

CABIN1

CAMK2A

EP300

GSK3B

HRAS

KRAS

MAP3K5

MAPK8

PIK3R1

PRKAR2A

SCN1A

PLCG1

F

CACNA1C

CAMK2B

GATA4

HAND1

IGF1

LIF

MAP3K7

MEF2A

PIK3R2

PRKAR2B

SCN5A

PRKCD

G

CACNA1G

CAMK2G

GNA11

HAND2

IGF1R

MAP2K1

MAPK1

MEF2C

PLCB1

PRKCA

SCNN1A

SCNN1B

H

CACNA1H

CAMK4

GNAI1

HDAC1

IL11

MAP2K2

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.