产品介绍：

      NF-κB几乎存在于所有动物细胞中。作为二聚体转录因子发挥作用并调节基因的表达，影响广泛的生物过程，包括先天性和适应性免疫、炎症、应激反应、B 细胞发育和淋巴器官发生。NF-κB 的激活涉及两个主要的信号通路：经典途径由肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-1 (IL-1) 或细菌和病毒感染的副产物诱导。该途径依赖于 IKK 介导的 Ser32和Ser36上的 IkappaB-α 磷酸化，导致其降解，从而允许 p50/p65 NF-kappaB二聚体进入细胞核并激活基因转录。非典型途径不依赖于 IKK，并且依赖于 Tyr42 上的 IkappaB-alpha 或 IkappaB-alpha PEST 域中的 Ser 残基的磷酸化。非经典途径由 TNFR 超家族的特定成员触发，例如淋巴毒素-β (LT-β) 或 BAFF。它涉及 NIK 和 IKK-alpha 介导的 p100 磷酸化和加工为 p52，导致 p52/RelB 异源二聚体的核易位。

      沃吉基因NFkB信号通路PCR阵列括编码 Rel、NFκB 和 IκB 家族成员的基因、NFκB 相关基因、细胞外激活通路的配体和受体，以及传播信号的激酶和转录因子等关键的90个基因。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	NFkB Signaling Pathway PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	wc-mRNA0303-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AGT

AKT1

ATF1

BCL2A1

BCL2L1

BCL3

BIRC2

BIRC3

CAMKK1

CAMKK2

CARD11

CASP1

B

CASP8

CCL2

CCL20

CCL5

CD40

CD83

CFLAR

CHUK

CSF1

CSF2

CSF3

CXCL2

C

CXCL3

CXCL8

EGFR

EGR1

ELK1

FADD

FASLG

FOS

HMOX1

ICAM1

IFNA1

IFNG

D

IKBKB

IKBKG

IL10

IL1A

IL1B

IL1R1

IRAK1

IRAK2

IRF1

JUN

LTA

LTBR

E

MALT1

MAP3K1

MAP3K14

MAP3K7

MYD88

NFKB1

NFKB2

NFKBIA

NFKBIE

NOD1

PSIP1

RAF1

F

REL

RELA

RELB

RHOA

RIPK1

STAT1

STX11

TAB1

TBK1

TICAM1

TIFA

TIMP1

G

TLR1

TLR2

TLR3

TLR4

TLR6

TLR9

TNF

TNFAIP2

TNFAIP3

TNFRSF10A

TNFRSF10B

TNFRSF1A

H

TNFRSF1B

TNFSF10

TRADD

TRAF2

TRAF3

TRAF6

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（human）	相关基因
NFκB 信号配体和受体	CD40,CD83,CXCL8 ,EGFR ,FASLG ,IL10,IL1A,IL1B,IL1R1,LTBR,NOD1 ,TLR1,TLR2,TLR3,TLR4,TLR6,TLR9,TNF, TNFRSF10A ,TNFRSF10B ,TNFRSF1A ,TNFRSF1B,TNFSF10.
NFκB 的细胞质隔离/释放	BCL3,CHUK ,IKBKB ,IKBKG,NFKBIA ,NFKBIE.
转录因子	NFKB1,NFKB2,REL,RELA,RELB.
NFκB下游的信号传导	BIRC2 ,FADD,IRAK1,IRAK2,IRF1,MYD88,RIPK1,TBK1,TICAM1 ,TNFAIP3,TRADD,TRAF2,TRAF3,TRAF6.
NFκB反应基因	AGT,BCL2A1 ,BCL2L1 ,BIRC3,CCL2 ,CCL5 ,CSF1 ,CSF2 ,CSF3 ,CXCL8 ,ICAM1,IFNA1,IFNG,LTA ,TNF.
其他 NFκB 信号基因	AKT1,ATF1,CAMKK1,CAMKK2,CARD11,CASP1 ,CASP8 ,CFLAR ,EGR1,ELK1,FOS,HMOX1,JUN,MALT1,MAP3K1 , MAP3K14,MAP3K7,PSIP1,RAF1,RHOA,STAT1,TAB1,TIMP1.
特征基因	BIRC3 ,CCL20 ,CD83,CXCL2 ,CXCL3,CXCL8 ,ICAM1,IRF1,NFKB1,NFKBIA ,NFKBIE,STX11,TIFA,TNF,TNFAIP2 ,TNFAIP3

   

NFkB信号通路图：

图片来源于：https://www.genome.jp/pathway/hsa04064

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

    WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.