产品介绍

路径描述

      当前生物学中最基本的问题之一是如何在发育和成年期间保持细胞存活和死亡之间的关键平衡。未经训练的细胞分裂和存活会导致各种形式的肿瘤，而过度或过早的细胞死亡可能会导致各种疾病，如阿尔茨海默氏症、帕金森氏症和多发性硬化症。在神经系统中，一个神经营养素家族，包括NGF（神经生长因子）、BDNF（脑源性神经营养因子）、NTF3（神经营养素3）和NTF4/5（神经营养蛋白4/5），维持着细胞存活和死亡的关键平衡。其中最好的特征是NGF，这是一种神经营养蛋白，对不同外周和中枢神经元的生长和存活很重要。NGF在离散的中枢神经系统（CNS）区域内表达，并由交感神经元和一些感觉神经元靶向的组织分泌。NGF对神经元生长和存活的影响是由高亲和力细胞表面受体TRKA（酪氨酸激酶受体-a）和低亲和力神经营养受体p75（NTR）（p75神经营养受体）介导的。NGF可能通过TRKA受体发出其神经保护作用的信号，并通过p75受体触发一些细胞的凋亡。NGF是胆碱能神经元最有效的生长因子，它影响神经元细胞的增殖、分化、存活和死亡。它对神经系统的健康和福祉至关重要，是治疗阿尔茨海默病的一种很有前途的候选药物。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	NGF Pathway PCR Array
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0190-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Akt1

Araf

Atf4

Bax

Braf

Casp9

Cdc42

Chuk

Creb1

Creb3

Creb3l4

Crebbp

B

Crk

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Gab1

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Hras

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Kras

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C

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Map3k2

Map3k3

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Map3k5

Mapk1

Mapk10

Mapk3

Mapk7

Mapk8

Mapk9

Mras

D

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Nfkb2

Ngf

Ngfr

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E

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Pik3r5

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Plcg2

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Prkcz

F

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Rac2

Rac3

Raf1

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Rap1b

Rel

Rela

Relb

Rhoa

Rhog

G

Rock1

Rock2

Rras

Rras2

Shc1

Shc2

Shc3

Smpd1

Smpd2

Smpd3

Snta1

Sos1

H

Sos2

Srf

Traf2

Traf4

Traf6

Trp53

Actb

Gapdh

Hprt

B2m

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.