产品介绍

      NK细胞可以通过直接释放裂解颗粒或通过Fas配体或TRAIL的表达诱导死亡受体介导的细胞凋亡来杀死病毒感染的转化细胞。穿孔素和颗粒酶是裂解颗粒的主要成分，它们的生物发生是一个高度调节的过程，以防止这些细胞毒性分子合成过程中的损伤。此外，NK细胞已经开发了几种策略来保护自己免受颗粒物在脱颗粒时的细胞毒性活性的影响。虽然颗粒介导的细胞凋亡是一个快速的过程，但死亡受体介导的毒性需要更多的时间。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	NK Cell Mediated Toxicity PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0210-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

BID

FAS

GZMB

ICAM2

KIR2DL1

KIR2DS4

MAPK1

NFATC2

PLCG1

RAC3

TNFRSF10B

VAV3

B

CASP3

FASLG

HCST

IFNAR1

KIR2DL2

KIR2DS5

MAPK3

PAK1

PLCG2

RAF1

TNFSF10

ZAP70

C

CD244

FCER1G

HLA-A

IFNAR2

KIR2DL3

KIR3DL1

MICA

PIK3CA

PRF1

SH2D1A

TYROBP

NFATC1

D

CD247

FCGR3A

HLA-B

IFNG

KIR2DL4

KIR3DL2

MICB

PIK3CB

PTK2B

SH3BP2

ULBP1

PIK3R3

E

CD48

FCGR3B

HLA-C

IFNGR1

KIR2DL5A

KLRC1

NCR1

PIK3CD

PTPN11

SHC1

ULBP2

RAC2

F

CSF2

FYN

HLA-E

IFNGR2

KIR2DS1

KLRD1

NCR2

PIK3R1

PTPN6

SHC2

ULBP3

TNF

G

dap-10

gmcsf

HLA-G

ITGAL

KIR2DS2

LCK

NCR3

PIK3R2

RAC1

SYK

VAV1

VAV2

H

dap-12

GRB2

ICAM1

ITGB2

KIR2DS3

LCP2

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.