产品介绍：

坏死性凋亡也是PCD的一种形式，由各种细胞因子和模式识别受体 (PRR) 介导。因坏死性凋亡而死亡的细胞表型包括肿胀、膜破裂及染色体凝聚，并释放损伤相关分子模式 (DAMP)、炎症细胞因子和趋化因子，从而介导极端炎症反应。

坏死性凋亡信号通路主要通过受体相互作用蛋白激酶 3 (RIPK3) 的激活进行调节，RIPK3 磷酸化混合谱系激酶结构域样蛋白 (MLKL)，介导 MLKL 寡聚化。在坏死性凋亡过程中，这些蛋白质通过磷酸化、泛素化、糖基化和蛋白质-蛋白质相互作用通过翻译后调节进行微调。

  大多数关于坏死性凋亡分子机制的研究涉及肿瘤坏死因子（TNF）信号通路。通常，TNF 通过 NF-κB 信号传导激活促炎基因来诱导炎症反应。将 TNF 与其受体TNFR1连接后，复合物 I 由 TNFR1 相关死亡域蛋白 TRADD、TRAF2、RIPK1、细胞凋亡抑制剂（cIAP1 或 cIAP2）组成)和线性泛素链组装复合物 (LUBAC) 被招募。在复合物 I 中，cIAPs 和 LUBAC 通过 K63 连接的线性泛素链促进 RIPK1 泛素化，为招募下游蛋白质如 TAK1、TAB2/3提供平台，以及由 IKKα、IKKβ 和 NFκB 必需调节剂 (NEMO)组成的 IκB 激酶 (IKK) 复合物。募集的下游复合物激活 NF-κB 和MAPK通路，导致促炎基因表达增加。然而，在某些条件下，例如复合物 I 的不稳定或 RIPK1 泛素化的抑制，TNF 可以触发胞质凋亡复合物（complex II a or II b）的形成，包括 Fas 相关蛋白与死亡域 (FADD)和 caspase-8，这个复合体执行细胞凋亡。

产品内容：

品名：	Necrosis PCR Array
种属：	Rat
货号：	wc-mRNA0100-R
规格：	96孔板
品牌：	WCGENE ® biotech
产品：	96孔引物预制板，封板膜，说明书
储存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Aifm1

Ar

Atp6v1g2

Bax

Bid

Birc3

Bmf

Bnip3l

Capn1

Capn2

Capn3

Capn5

B

Capn6

Capn7

Capns1

Car9

Casp8ap2

Cd40

Cetn1

Cflar

Commd4

Cyba

Cybb

Cyld

C

Defb1

Dennd4a

Dpysl4

Eda2r

Fadd

Faf1

Fas

Faslg

Fem1b

Foxi1

Fus

Galnt5

D

Glud1

Glul

Grb2

Hspbap1

Ikbkg

Kcnip1

Madd

Mag

Map3k7

Mgea5

Myd88

Nfkb1

E

Ngf

Ngfr

Ngfrap1

Nox1

Nox4

Olr1583

Parp1

Parp2

Phtf2

Pidd1

Ppia

Ppid

F

Pvr

Pygl

Rab25

Rgd1311517

Ripk1

Ripk2

Ripk3

Rnf31

S100a7a

Slc25a4

Sp1

Spata2

G

Sycp2

Tbp

Tmem123

Tmem57

Tnf

Tnfrsf10b

Tnfrsf14

Tnfrsf17

Tnfrsf1a

Tnfrsf1b

Tnfrsf25

Tnfrsf4

H

Tnfrsf8

Tnfsf10

Tnfsf15

Tradd

Traf2

Txnl4b

Actb

Gapdh

Hprt1

Ubb

NTC

NTC

基因分类（Rat）	相关基因
TNF诱导的坏死：	ATP6V1G2,BMF,C1orf159,CCDC103,COMMD4,CYLD,DEFB1,DENND4A,DPYSL4,EIF5B,FOXI1,GALNT5,GRB2, HSPBAP1,JPH3,KCNIP1,MACO1,MAG,OR10J3,PARP2,PVR,RAB25,S100A7A,SPATA2,SYCP2,TXNL4B.
坏死性凋亡复合体相关：	FUS,NFKB1,RIPK2,RIPK3.GLUD1,GLUL,PYGL,RIPK1,CAPN2,CAPN3,CAPN5,CAPN6,CAPN7,CAPNS1,PPID,CAPN1.
死亡受体：	FAS,TNFRSF10B ,TNFRSF1A .
死亡受体信号：	BEX3,BID,BIRC3 ,CASP8AP2,EDA2R,FADD,FAF1,FEM1B,IKBKG,MADD,MYD88,NGF,NGFR,PARP1 ,PIDD1 ,TNFRSF14,TNFRSF17,TNFRSF1B,TNFRSF25 ,TNFRSF4 ,TNFRSF8,TNFSF15,TRADD,TRAF2.

细胞坏死通路图

 

图片来源于：https://www.genome.jp/pathway/map04217

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.