产品介绍：

肾脏在药物排泄中的关键作用使其成为引起药物相关毒性反应的主要器官之一，也是毒理学研究的重要目标。在模型系统中，在这些毒性反应期间持续表现出增加或减少表达的基因用作预测潜在不良临床结果的标记。肾单位内的肾脏排泄开始于肾小球的血液过滤。然后滤液通过近端小管（用于重要化合物的再吸收）、Henle环（用于尿液浓缩）、远端小管，最后通过收集管（用于尿液的浓缩和去除）。药物引起的肾毒性研究集中于近端小管毒性，其中大多数药物代谢产物发生再吸收。该阵列包括当暴露于多种已知的肾毒性药物时表现出表达差异的基因。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Nephrotoxicity PCR Array plate
种    属：	HUMAN
货    号：	WC-MRNA0101-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

HUMAN

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

A2M

BHMT

CCNB2

CP

EGF

GAMT

GSTK1

IGFBP3

MYC

RTN4

SPP1

VCAM1

B

AASS

BMP1

CCND1

CST3

FGA

GATM

GSTP1

IPMK

NOL3

SCD

SPRR1A

VIM

C

ABCB1

BMP4

CCNG1

CTSS

FGB

GC

HAVCR1

KLK1

NOX4

SLC22A1

TBP

IGFBP1

D

ABCC2

BTG2

CCS

CXCL1

FMO2

GHR

HMOX1

LCN2

NPHS2

SLC22A5

TIMP1

MT1A

E

ALDH1A1

CALB1

CD44

CXCL10

FN1

GLUL

HMOX2

LGALS3

NQO1

SLC22A6

TMSB10

RGN

F

ANGPTL4

CAT

CDKN1A

CYP2C19

G6PC

GPNMB

HSP90AA1

MCM6

OAT

SOCS3

TNFRSF12A

SOD3

G

ANXA5

CCL3

CDKN3

CYP2D6

G6PD

GPX2

IDH1

MGP

ODC1

SOD2

UCHL1

UGT1A1

H

ATF3

CCNB1

CLU

CYR61

GADD45A

GPX8

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Human）		相关基因
肾毒性上调	细胞凋亡	ANGPTL4,ANXA5,BTG2,CD24,CD44,CDKN1A,CLU,GADD45A,GSTP1,HMOX1,NQO1,RTN4,SOCS3,TNFRSF12A.
	细胞周期	CCND1,CCNG1,CDKN1A ,GADD45A,MCM6.
	金属离子结合	BMP1,CCS,CP,CTSS,HMOX1,HMOX2,MT1A.
	氧化应激	CLU,G6PD,GPX2,GPX8,HMOX1,HMOX2,NQO1.
	细胞增殖	ATF3,BTG2,CCND1,CD24,CDKN1A,CLU,CXCL1,CXCL10 ,GLUL,GPNMB,HMOX1,HSP90AA1,TIMP1,UCHL1,VCAM1.
	组织重塑	CST3,FN1,HAVCR1,SPP1,TIMP1.
	转运因子	ABCB1,ABCC2.
	异生物质代谢	CYP2C19,GSTP1.
	细胞外基质（ECM）分子	ANGPTL4,CCL3,CD44,CST3,FGB,LGALS3,MGP,TIMP1
	细胞骨架调节剂	CCL3 ,G6PD,SPRR1A,TMSB10,VIM.
	肾毒性中其他基因上调	A2M,GC,IGFBP1,LCN2,UGT1A1.
肾毒性下调	细胞凋亡	Bmp4,Cat,Ghr,Igfbp3,Sod2.
	细胞周期	Bmp4,Egf.
	金属离子结合	Bhmt,Idh1,Rgn,Scd1,Sod2,Sod3.
	氧化应激	Cat,Gatm,Idh1,Sod2,Sod3.
	细胞增殖	Bmp4,Egf,Igfbp3,Nox4,Odc1,Sod2.
	转运因子	Slc22a1,Slc22a5,Slc22a6.
	异生物质代谢	Fmo2,Gstk1.
	细胞外基质（ECM）分子	Bmp4,Ccn1,Sod3.
	其他基因肾毒性下调	Aass,Aldh1a1,Calb1,G6pc,Gamt,Ipmk,Klk1,Nphs2,Oat.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.