产品介绍：

       NO（一氧化氮）是一种重要的信号分子，具有血管舒张和抗炎作用，在降低高血压和心血管疾病方面具有积极作用。同时，NO也与健康风险有关，如致癌风险增加和婴儿缺氧。有人认为，NO也可以提高线粒体效率。NO可以通过经典的精氨酸NO合酶途径由L-精氨酸形成，也可以通过脱氧珠蛋白直接由膳食亚硝酸盐形成。

       沃吉基因一氧化氮信号通路PCR阵列包含参与一氧化氮生物合成、超氧化物代谢的基因和参与氧化应激反应的基因。还包括由NO诱导或抑制的基因，这些基因可以作为细胞系统中NO通路激活的指标。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内

品    名：	Nitric Oxide Signaling Pathway PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0108-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

 基因列表

mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Aass

Als2

Apoe

Aqp1

Aqp2

Bax

Bcl2l1

Calm1

Capns1

Cat

Cav1

Ccnd1

B

Ccng1

Ccs

Cd151

Cdkn1a

Clcf1

Ctsb

Cyba

Ddah1

Ddah2

Dlg4

Dynll1

Egr1

C

Epx

Ercc2

Fas

Fos

Gab1

Gadd45a

Gnb2

Gpx1

Gpx2

Gpx3

Gpx4

Gpx5

D

Gpx6

Gpx7

Grin1

Hmgb1

Hpn

Idh1

Irgm1

Itpr1

Itpr2

Mdm2

Med4

Mpo

E

Myc

Ncf2

Nedd1

Nos1

Nos2

Nos3

Nox1

Nox4

Noxa1

Noxo1

Nudt15

Pea15a

F

Ppp1r15b

Ppp3ca

Prdx1

Prdx2

Prdx6

Prkaca

Prnp

Prpf4

Psmb5

Ptx3

Rb1

Recql4

G

Rprm

Rras

Rrp1

Scd1

Scd2

Scd3

Sfn

Sod1

Sod2

Sod3

Tbp

Tpo

H

Trp53

Txnip

Txnrd2

Ubc

Ucp3

Xpa

Actb

Gapdh

Hprt

B2m

NTC

NTC

基因分类（Mouse）		相关基因
一氧化氮生物合成	氧化还原酶	Nos1 ,Nos2 ,Nos3
	一氧化氮生物合成的正调节因子	Ptx3
	一氧化氮生物合成的负调控	Cav1,Dynll1
	其他一氧化氮生物合成基因	Ddah1,Ddah2,Hmgb1
细胞凋亡		Bax,Bcl2l1,Cdkn1a ,Fas,Myc,Trp53
细胞周期		Ccnd1,Ccng1,Cdkn1a ,Fos,Gadd45a,Myc,Rb1,Sfn ,Trp53
转录调控		Egr1,Fos,Myc,Rb1,Trp53
其他一氧化氮诱导基因		Clcf1,Irgm1,Mdm2,Nedd1,Rprm,Rrp1
抑制一氧化氮		Capns1,Cd151,Hpn,Pea15a,Rras,Ubc
一氧化氮信号传导		Calm1,Grin1,Nos1,Ppp3ca,Prkaca
超氧化物代谢	超氧物释放	Nox1,Nox4,Sod1
	氧化还原酶	Cyba,Nos1 ,Nos2 ,Nox4,Recql4,Scd1,Scd2,Scd3,Sod1,Sod2,Sod3
	过氧化物酶	Sod1,Sod2,Sod3
	抗氧化活性	Sod1,Sod3
	其他超氧化物代谢基因	Ccs,Ncf2,Nox1,Nox4,Noxa1,Noxo1
氧化应激	抗氧化剂	Prdx1,Prdx2,Prdx6,Sod1
	谷胱甘肽过氧化物酶	Gpx1,Gpx2,Gpx3,Gpx4,Gpx5,Gpx6,Gpx7
	氧化还原酶	Aass,Cat,Epx,Gpx1,Gpx2,Gpx3,Gpx4,Gpx5,Gpx6,Gpx7,Idh1,Mpo,Prdx1,Prdx2,Prdx6,Sod1,Tpo,Txnrd2
	过氧化物酶	Aass,Cat,Ctsb,Epx,Gpx1,Gpx2,Gpx3,Gpx4,Gpx5,Gpx6,Gpx7,Mpo,Prdx1,Prdx2,Prdx6 (Aop2),Prpf4,Tpo
	转录调控	Ercc2,Med4
其他氧化应激反应基因		Als2,Apoe,Gab1,Nudt15,Ppp1r15b,Prnp,Psmb5,Txnip,Ucp3,Xpa

一氧化氮信号通路图：

图片来源于：https://www.wikipathways.org/index.php/Pathway:WP1995

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.