产品介绍：

     肺癌是工业化国家男性和女性癌症死亡的主要原因。非小细胞肺癌（NSCLC）约占肺癌的85%，代表了一组异质性癌症，主要由鳞状细胞癌（SCC），腺癌（AC）和大细胞癌组成。NSCLC中改变的分子机制包括癌基因如K-RAS，EGFR和EML4-ALK的激活，以及肿瘤抑制基因如p53，p16INK4a，RARβ和RASSF1的失活。K-RAS基因内的点突变使GTP酶活性失活，并且p21-RAS蛋白连续地将生长信号传递至细胞核。EGFR的突变或过表达导致增殖优势。EML4-ALK融合导致组成型ALK活化，其导致细胞增殖，侵袭和细胞凋亡的抑制。p53的失活突变可导致更快速的增殖和减少的细胞凋亡。由p16INK4a编码的蛋白质通过CDK4和CDK6的竞争性结合抑制CDK-细胞周期蛋白-D复合物的形成。p16INK4a表达缺失是NSCLC的共同特征。RAR-beta是一种具有维生素a依赖性转录活性的核受体。RASSF1A能够与RAS效应物Nore-1形成异二聚体。因此，RASSF1A的缺失可能会使RAS活性的平衡转向促进生长的作用。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品   名：	Non-Small Cell Lung Cancer PCR Array
种   属：	HUMAN
货   号：	wc-mRNA0338-H
规   格：	96孔板
品   牌：	Wcgene® biotech
产   品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储   存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACTR3B

AKT1

AKT2

ALK

ARAF

BAD

BRAF

BRCA1

CADM1

CALB2

CASK

CASP3

B

CASP9

CCND1

CDC42BPB

CDH1

CDH10

CDK4

CDK6

CDKN2A

CPA4

CYP1A1

DDR2

E2F2

C

EGF

EML4

EPHA3

EPHA5

ERBB2

FAM83B

FGFR1

FHIT

FIGF

FOXO3

GRAMD4

GRB2

D

HRAS

KRAS

KRT19

KRT20

KRT7

MAP2K1

MAP2K2

MAPK1

MAPK3

MMP2

MUC1

MYO18B

E

NKX2-1

NME1

NRAS

NTRK3

OGG1

PDPK1

PEBP1

PIK3CA

PIK3CD

PIK3CG

PIK3R1

PIK3R3

F

PIK3R5

PLCG2

PRKCG

PRKCI

PTGS2

PTHLH

RAF1

RAP2B

RARB

RASSF1

RASSF5

RB1

G

RBMS3

ROS1

RXRA

RXRG

S100A2

S100A7

SFTPB

SFTPC

SOS1

SOS2

SOX2

STK11

H

STK4

TGFA

TP53

TTN

VEGFA

WNK3

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

非小细胞肺癌通路图

图片来源于：https://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?map05223

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.