产品介绍：

在正常生理条件下，大多数哺乳动物细胞在等渗环境中生长。肾髓质是该规则的一个例外，不仅在尿液浓度（>10倍正常水平）期间经历高渗透压，而且在任何给定时间经历广泛的潜在盐浓度。渗透压变化影响由关键转录因子TonEBP/OREBP（NFAT5）驱动的数百个基因的表达。在渗透胁迫期间，水转运蛋白，离子转运基因和蛋白质伴侣蛋白的表达增加。细胞也经历细胞骨架重排。其他典型的细胞效应包括氧化应激，细胞周期停滞，转录/翻译停滞和线粒体去极化，所有这些都可能导致DNA损伤和细胞凋亡。在蜂窝系统中除肾髓质外，一般的电解质失衡可导致慢性低钠血症和脑桥中央髓鞘溶解，这是一种罕见的疾病，发生在中枢神经系统中，涉及一些通常在肾髓质中表达的相同转运蛋白。该阵列包括分子转运蛋白，直接NFAT5靶标以及参与高渗反应的激素和受体。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Osmotic Stress PCR Array plate
种    属：	HUMAN
货    号：	WC-MRNA0115-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

HUMAN

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ABCB1

AQP3

Bax

DUSP1

GADD45G

HSPB1

Letm1

MLC1

PAX2

SLC38A2

TAT

VIM

B

ADM

AQP4

Bdkrb2

EDN1

GUCA2A

IL1B

Lrrc8a

NFAT5

PCK2

SLC5A3

TBP

ZFP36L1

C

AGT

AQP5

CALR

EGFR

HMOX1

IL8

LTB

NFKBIA

PDIA4

SLC6A12

TGFA

MAPK8

D

AGTR1

AQP9

CD9

EGR1

HSP90AA1

INS

MAP2K2

NOS3

PLAT

SLC6A6

TNF

PAK2

E

AKR1B1

ATF4

CFTR

EGR3

HSPA1A

ITGB1

MAP3K1

NPR1

PTK2

SLC9A2

TP53

SLC2A1

F

AKT1

ATP1A1

CRYAB

FOS

HSPA4

JUN

MAPK1

ODC1

SGK1

SLC9A3

TPM4

SRC

G

AQP1

ATP1B1

CTGF

GADD45A

HSPA4L

KCNJ1

Mapk13

OXT

SLC14A2

SNAI1

TRPV4

VEGFA

H

AQP2

AVP

DDIT3

GADD45B

HSPA5

LCN2

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类(Human)		相关基因
渠道&转运因子	水转运因子	AQP1,AQP2,AQP3,AQP4,AQP5,AQP9.
	离子通道	CFTR,KCNJ1,MLC1,TRPV4.
	其他转运因子	ABCB1,ATP1A1,ATP1B1,LCN2,SLC14A2,SLC2A1,SLC38A2,SLC5A3,SLC6A12,SLC6A6,SLC9A2,SLC9A3.
TonEBP/OREBP（NFAT5）目标		AQP2,SLC14A2,SLC5A3,SLC6A12,SLC6A6.
激素和受体		ADM,AGT,AGTR1,AVP,EDN1,GUCA2A,INS,NPR1,OXT.
分子伴侣		CALR,CRYAB,HSP90AA1,HSPA1A,HSPA4,HSPA4L,HSPA5,HSPB1.
DNA损伤和修复		DDIT3,GADD45A,GADD45B,GADD45G,HMOX1,MAPK1,TP53
氧化应激		CRYAB,DDIT3,DUSP1,EGFR,FOS,HMOX1,JUN,NOS3,TAT,TPM4.
转译的调控		AKT1,CALR,HSPB1,MAPK1,ZFP36L1
线粒体基因		AKT1,HSP90AA1,HSPA4,JUN,MAP3K1,NOS3,PCK2,TP53
细胞骨架调节剂		CALR,CRYAB,EDN1,MAP3K1,PTK2,VIM.
细胞凋亡		AKT1,IL1B,MAPK8,NFKBIA,PAK2,SGK1,VEGFA.
细胞周期		AKT1,IL1B.
细胞粘附分子		AGT,CCN2,CD9,CXCL8,EGFR,IL1B,ITGB1,TNF.
转录因子		AKR1B1,ATF4,DDIT3,EGR1,EGR3,FOS,JUN,NFAT5,PAX2,SNAI1,TP53,ZFP36L1.
其他渗透压基因		LTB,MAP2K2,ODC1,PDIA4,PLAT,SRC,TGFA

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.