产品介绍：

高龄、性别和代谢受阻是发生骨质疏松症（OP）的主要因素，其他因素包括绝经后妇女性类固醇生成减少。OP是一种骨代谢紊乱，其特征是骨矿物质密度（BMD）低，并且由于骨重塑（骨吸收和骨形成之间的平衡）的破坏，骨折发生率增加。骨重塑由破骨细胞（负责骨吸收的细胞）和成骨细胞（骨形成的细胞）进行。成骨细胞在骨代谢中起着中心作用，负责骨基质合成和矿化、生长因子和激素的合成以及破骨细胞生成对骨吸收的调节。在OP中，骨重塑过程中的病理失衡通常与RANKL/OPG信号平衡中断有关，其中RANKL水平升高有利于通过破骨细胞的形成、功能和骨密度降低的存活进行吸收。最近的证据还表明，炎症在破坏破骨细胞-成骨细胞平衡中起着重要作用，从而影响骨密度。目前正在进行大量研究，以确定OP发病的分子机制，目的是获得治疗和预防OP的新靶点，以及识别早期诊断标志物。

沃吉基因骨质疏松PCR阵列分析的基因与成骨细胞和破骨细胞活性相关，包括WNT和BMP信号通路、ECM和骨基质重塑，以及目前与OP分子发病机制相关的细胞因子和生长因子。

WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Osteoporosis PCR Array plate
种    属：	RAT
货    号：	WC-MRNA0114-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

RAT

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Acp5

Bglap

Clcn7

Cyp19a1

Fgfr2

Il6

Lrp1

Mthfr

Plod2

Sost

Tnfrsf11a

Wnt10b

B

Adam17

Bmp2

Cnr2

Dbp

Ghrh

Il6r

Lrp5

Nfatc1

Prl

Sparc

Tnfrsf11b

Wnt3a

C

Adcy10

Bmp7

Col1a1

Dkk1

Hsd11b1

Il6ra

Lrp6

Nog

Pth

Spp1

Tnfrsf1b

Mstn

D

Alox12

Calca

Col1a2

Enpp1

ID4

IRAK3

Lta

Nos3

Pth1r

Stat1

Tnfsf11

PDLIM4

E

Alox15

Calcr

Comt

Esr1

IFNGR1

Itga1

Ltbp2

Npy

Runx2

Tbp

Tshr

Shbg

F

Alox5

Casr

Crtap

Esr2

Igf1

Itgb3

Mab21l2

Nr3c1

Sfrp1

Tgfb1

Twist1

Tnfaip3

G

Alpl

Cd40

Ctsk

Esrra

Igfbp2

Lep

Mmp2

P2rx7

Sfrp4

Timp2

Vdr

Vegfa

H

Ar

CIITA

Cyp17a1

Fgfr1

Il15

Lepre1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）	相关资料
骨重塑和BMP信号	Adcy10,Alox12,Alox15,Alox5,Alpl,Bglap,Bmp2,Clcn7,Col1a1,Col1a2,Comt,Crtap,Ctsk,Enpp1,Hsd11b1,Igf1,Itga1,Itgb3,Mmp2,Mthfr,Nfatc1,Nog,Nos3,P2rx7,Plod2,Runx2,Sfrp1,Sost,Sparc,Spp1,Stat1,Timp2,Twist1,Wnt10b,Wnt3a
促钙激素及受体	Ar,Calca,Calcr,Casr,Cyp17a1,Cyp19a1,Dbp,Esr1,Esr2 ,Esrra,Nr3c1,Prl,Pth,Pth1r,Shbg,Tshr,Vdr
细胞因子、生长因子和受体	Bmp2,Bmp7,Cd40,Cnr2,Fgfr1,Fgfr2,Ghrh,Igfbp2,Il15,Il6,Il6r,Lrp1,Lrp5,Lrp6,Lta ,Ltbp2,Mstn,Npy,Tgfb1,Tnfaip3,Tnfrsf11a,Tnfrsf11b,Tnfrsf1b,Tnfsf11,Vegfa
成骨细胞活性和分化	Alpl,Bglap,Bmp2,Runx2
RANK/RANKL/OPG信令	Tnfrsf11a,Tnfrsf11b,Tnfsf11
WNT/β-连环蛋白信号转导	Dkk1,Lrp1,Lrp5,Lrp6,Sfrp4,Sost,Twist1,Wnt10b,Wnt3a
其他骨质疏松症基因	Acp5,Lep,Mab21l2

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.