产品介绍：

氧化应激代表了活性氧的产生和表现之间的不平衡与生物系统容易排毒或修复产生的损伤的能力。正常氧化还原组织状态的干扰会通过产生过氧化物和自由基的产生，从而损害细胞的所有成分，包括蛋白质，脂质和DNA。一些反应性氧化物种甚至可以通过称为氧化还原信号传导的现象充当使者。

在人类中，氧化应激与许多疾病有关。例子包括镰状细胞疾病，动脉粥样硬化，帕金森氏病，心力衰竭，心肌梗塞，阿尔茨海默氏病，精神分裂症，双相情感障碍，脆弱的X综合征和慢性疲劳综合征，但短期氧化应激也可能在短期中很重要。预防通过诱导呈线型的过程来预防衰老。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Oxidative Stress PCR Array plate
种    属：	MOUSE
货    号：	WC-MRNA0118-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Alb

Ccs

Ercc2

Gpx2

Gstk1

Ift172

Ncf2

Noxo1

Prdx6

Serpinb1b

Tpo

Vim

B

Als2

Ctsb

Ercc6

Gpx3

Gstm2

Il19

Ngb

Nqo1

Prnp

Slc38a1

Txn1

Xpa

C

Aox1

Cyba

Fancc

Gpx4

Gstm3

Il22

Nos1

Park7

Psmb5

Sod1

Txnip

Noxa1

D

Apc

Cygb

Fmo2

Gpx5

Gstm4

Krt1

Nos2

Prdx1

Ptgs1

Sod2

Txnrd1

Prdx5

E

Apoe

Dnm2

Fth1

Gpx6

Gstp1

Lpo

Nos3

Prdx2

Ptgs2

Sod3

Txnrd2

Scd1

F

Atr

Duox1

Gclc

Gpx7

Hmox1

Mb

Nox1

Prdx3

Rag2

Sqstm1

Txnrd3

Tbp

G

Cat

Ehd2

Gclm

Gsr

Hspa1a

Mpo

Nox4

Prdx4

Recql4

Srxn1

Ucp2

Ucp3

H

Ccl5

Epx

Gpx1

Gss

Idh1

Ncf1

Actb

Gapdh

Hprt1

B2m

NTC

NTC

基因分类（Mouse）	相关基因
谷胱甘肽过氧化物酶	Gpx1，Gpx2，Gpx3，Gpx4，Gpx5，Gpx6，Gpx7，Gstk1，Gstp1
过氧化物氧还蛋白	Ehd2，Prdx1，Prdx2，Prdx3，Prdx4，Prdx5，Prdx6
其他过氧化物酶	Cat，Ctsb，Duox1，Epx，Lpo，Mpo，Ptgs1，Ptgs2，Rag2，Serpinb1b，Tpo
其他抗氧化剂	ALB，Gsr，Sod1，Sod3，Srxn1，Txnrd1，Txnrd2，Txnrd3
活性氧代谢超氧化物歧化酶 （SOD）	超氧化物歧化酶（SOD）Sod1，Sod2，Sod3。
其他超氧化物代谢基因	Cyba，Ncf1，Ncf2，Nos2，Nox1，Nox4，Noxa1，Noxo1，Recql4，Scd1，Ucp2
其他活性氧（ROS）代谢基因	Aox1，Fmo2，Il19，Il22
氧化应激反应基因	Als2、Apoe、Cat、Ccl5、Ctsb、Duox1、Epx、Ercc2、Ercc6、Fth1、Gclc、Gclm、Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Gpx5、Gpx6、Gpx7、Gsr、Gss、Hmox1、Hspa1a、Idh1、Krt1、Mpo、Nqo1、Park7、Prdx1、Prdx2、Prdx6、Prnp、Psmb5、Sod1、Sqstm1、Tpo、Txn1、Txnip、Txnrd1，Txnrd2，Ucp3，Xpa
氧转运蛋白	Atr、Cygb、Dnm2、Fancc、Ift172、Mb、Ngb、Slc38a1、Vim

氧化应激信号通路图：

 

图片来源：https://www.wikipathways.org/index.php/Pathway:WP408

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.