产品介绍

路径描述

      PDGF（血小板衍生生长因子）是一个生长因子大家族的成员，包括VEGF（血管内皮生长因子）、PlGF（胎盘生长因子）和CTGF（结缔组织生长因子），CTGF是一种由人类血管内皮细胞和成纤维细胞分泌的PDGF样因子。PDGF是同源a和B多肽链的二聚体肽，它们被组装为同源二聚体（PDGFAA和PDGFBB）或异二聚物（PDGFAB）。PDGF通过与细胞表面特定的结构相关的高亲和力受体结合，调节其在靶细胞上的生物功能，即α和β。PDGFR-Alpha结合PDGFAA和PDGFBB，而PDGFR-Beta仅结合PDGFBB。PDGFR（PDGF受体）并不均匀分布在细胞膜中，而是集中在小窝中，小窝是参与内吞作用的不同膜内陷。配体结合后，PDGFR在许多酪氨酸残基上二聚并自磷酸化。酪氨酸磷酸化位点被PDGFR用作各种含有SH2结构域的蛋白质的锚定位点。配体结合诱导配体PDGFR复合物内化到内体中。在内涵体与溶酶体融合后，PDGFR复合物被降解。除了在溶酶体中降解外，PDGFRs在泛素化后也在蛋白酶体中进行细胞质降解。细胞迁移是由趋化因子的梯度触发的，包括PDGF（血小板衍生生长因子）及其受体。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	PDGF Pathway PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0193-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ARFIP2

IKBKE

MAP2K2

MAPK3

NFKBIE

PDGFA

PIK3C3

PLCG1

RELA

SLC9A1

SRF

VAV2

B

CDC42

IKBKG

MAP2K3

MAPK8

NRAS

PDGFB

PIK3CA

PLCG2

RELB

SLC9A2

STAT1

WASL

C

CHUK

JAK1

MAP2K4

MAPK9

PAK1

PDGFC

PIK3CB

PTGS2

RHOA

SLC9A3

STAT2

PLA2G2A

D

ELK1

JAK2

MAP2K5

MRAS

PAK2

PDGFD

PIK3CD

PTPN11

RRAS

SLC9A4

STAT3

REL

E

FOS

JAK3

MAP2K6

NFKB1

PAK3

PDGFRA

PIK3R1

RAC1

RRAS2

SLC9A6

STAT5B

SHC3

F

GRB2

JUN

MAP3K1

NFKB2

PAK4

PDGFRB

PIK3R2

RAF1

SHC1

SOS1

STAT6

SRC

G

HRAS

KRAS

MAPK1

NFKBIA

PAK6

PIK3C2A

PLA2G1B

RASA1

SHC2

SOS2

TIAM1

VAV1

H

IKBKB

MAP2K1

MAPK10

NFKBIB

PAK7

PIK3C2B

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.