产品介绍：

       PI3K-Akt信号通路被多种细胞类型刺激或毒性损伤激活，并调节转录、翻译、增殖、生长和存活等基本细胞功能。生长因子与其受体酪氨酸激酶（RTK）或G蛋白偶联受体（GPCR）的结合分别刺激Ia类和Ib类PI3K亚型。PI3K催化细胞膜上磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）的生成。PIP3反过来充当第二个信使，帮助激活Akt。一旦激活，Akt可以通过磷酸化参与凋亡、蛋白质合成、代谢和细胞周期的底物来控制关键的细胞过程。

       沃吉基因PI3K-AKT信号PCR阵列包含AKT和PI3K 家族及其调节基因，也包括凋亡，周期等多个生物学过程关键的90个基因。

       WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	PI3K-AKT Signaling PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0120-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AKT1

CD14

EIF2AK2

FOS

HSPB1

ITGB1

MTOR

PDK2

PRKCE

RASA1

SRF

WASL

B

AKT2

CD4

EIF4B

FOXO1

IGF1

JUN

MYD88

PDPK1

PRKCG

RBL2

TBP

YWHAH

C

AKT3

CD40

EIF4E

FOXO3

IGF1R

MAP2K1

NFKB1

PIK3CA

PRKCZ

RHEB

TCL1A

PDK1

D

APC

CDC42

EIF4EBP1

GJA1

IGF2

MAPK1

NFKBIA

PIK3CG

PTEN

RHOA

TIRAP

PRKCB

E

BAD

CDKN1B

EIF4G1

GRB10

IGF2R

MAPK14

PABPC1

PIK3R1

PTK2

RPS6KA1

TLR4

RAF1

F

BTK

CHUK

ELK1

GRB2

ILK

MAPK3

PAK1

PIK3R2

PTPN11

RPS6KB1

TOLLIP

SOS1

G

CASP9

CSNK2A1

FASLG

GSK3B

IRAK1

MAPK8

PDGFRA

PRKCA

RAC1

SHC1

TSC1

TSC2

H

CCND1

CTNNB1

FKBP1A

HRAS

IRS1

MTCP1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

基因分类（human）	相关基因
AKT和PI3K家族成员及其调节因子	AKT1,AKT2,AKT3,BTK,CD4,CD40,GRB10,GRB2,HSPB1 ,ILK,MTCP1,PAK1,PDK2, PDPK1,PIK3CA ,PIK3CG,PIK3R1 ,PIK3R2 ,PRKCA,PRKCB,PRKCZ,PTEN,TCL1A.
IGF1信号转导	CSNK2A1,ELK1,FOS,GRB2,HRAS,IGF1,IGF1R,IGF2,IGF2R,IRS1,JUN,MAP2K1,MAPK3 ,MAPK8 , PTPN11,RAF1,RASA1,SHC1,SOS1,SRF.
GSK3失活与β-连环蛋白积累	AKT1,APC,CCND1,CD14,CTNNB1,EIF2AK2,GJA1 ,GSK3B,IRAK1,MYD88,NFKB1,PDK1,TIRAP,TLR4,TOLLIP.
细胞骨架调节器	CDC42,PDGFRA,RAC1,RHOA,WASL.
PTEN依赖的细胞周期阻滞与凋亡	AKT1,CDKN1B ,FASLG ,FOXO3,GRB2,ILK,ITGB1,MAPK1 ,MAPK3 ,PDK1,PDK2,PTEN,PTK2 ,RBL2,SHC1,SOS1.
BAD磷酸化和抗凋亡途径	AKT1,BAD,GRB2,HRAS,IGF1R,IRS1,MAP2K1,MAPK1 ,MAPK3 ,RAF1,RPS6KA1,SHC1,SOS1, YWHAH.
eIF4e和p70 S6激酶的调控	AKT1,EIF4E,EIF4EBP1 ,EIF4G1,IRS1,MAPK1 ,MAPK14 ,MAPK3 ,MTOR,PABPC1,PDK1,PDK2, PRKCA,PTEN.
mTOR信号	AKT1,EIF4B,EIF4E,EIF4EBP1 ,EIF4G1,FKBP1A ,MTOR,PDK1,PDK2,PTEN,RHEB,RPS6KB1,TSC1, TSC2.
脂肪生成的调节	RPS6KB1.
其他AKT信号基因	CASP9,CHUK ,FOXO1,NFKBIA .

PI3K-AKT Signaling通路图:

 

图片来源于：https://www.genome.jp/pathway/map04151

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.