产品内容

品    名：	Pain: Neuropathic & Inflammatory PCR Array plate
种    属：	RAT
货    号：	WC-MRNA0116-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表：

rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Ace

Adora1

Adrb2

Alox5

Bdkrb1

Bdnf

Cacna1b

Calca

Cck

Cckbr

Ccl12

Ccl5

B

Ccr2

Cd200

Cd4

Chrna4

Cnr1

Cnr2

Comt

Csf1

Cx3cr1

Dbh

Edn1

Ednra

C

Faah

Gch1

Gdnf

Grin1

Grin2b

Grm1

Grm5

Htr1a

Htr2a

Il10

Il18

Il1a

D

Il1b

Il2

Il6

Il9

Itgam

Itgb2

Kcnip3

Kcnj6

Kcnq2

Kcnq3

Maob

Mapk1

E

Mapk14

Mapk3

Mapk8

Ngf

Ntrk1

Ntrk2

Ntrk3

Oprd1

Oprk1

Oprm1

P2rx3

P2rx4

F

P2rx7

P2ry1

Pdyn

Penk

Pla2g1b

Pnoc

Prok2

Ptger1

Ptger3

Ptger4

Ptges

Ptges2

G

Ptges3

Ptgs1

Ptgs2

Scn10a

Scn11a

Scn3a

Scn9a

Slc6a2

Tac1

Tacr1

Tbp

Tgfb1

H

Tlr2

Tlr4

Tnf

Trpa1

Trpv1

Trpv3

Actb

Gapdh

Hprt1

Ubb

NTC

NTC

基因分类（rat）		相关基因
Conduction of  Pain	Ion Channels		Trpa1,Trpv1,Trpv3.
	Sodium Channels		Scn10a,Scn11a,Scn3a,Scn9a,Slc6a2.
	PotassiumChannels		Kcnip3,Kcnj6,Kcnq2,Kcnq3.
	Purinergic(P2Y)Receptors		Adora1,P2rx3,P2rx4,P2rx7,P2ry1.
	Opioid Receptors		Oprd1,Oprk1,Oprm1.
	Cannabinoid Receptors		Cnr1,Cnr2.
Synaptic Trans mission	GlutamateReceptors		Grin1,Grin2b,Grm1,Grm5.
	Serotonin(5-Hydroxytryp tamine)Receptors		Htr1a,Htr2a.
	Calcium Channels		Cacna1b.
PainResponse Modulation	Eicosanoid Metabolism		Pla2g1b,Ptger1,Ptger3,Ptger4,Ptges,Ptges2,Ptges3,Ptgs1 (Cox1),Ptgs2 (Cox2)
	Inflammation		Ace,Alox5,Bdkrb1,Calca,Cck,Cckbr,Ccl12,Ccr2,Cd200,Cd4,Chrna4,Csf1 (Mcsf), Cx3cr1,Dbh,Edn1,Ednra,Faah,Gch1,Il10,Il18,Il1a,Il1b,Il2,Il6,Itgam,Itgb2,Mapk1  (Erk2),Mapk14 (p38alpha),Mapk3 (ERK1),Mapk8 (Jnk1),Penk,Pnoc,Prok2,Tac1, Tacr1,Tlr2,Tlr4,Tnf.
	Neurotransmitters		Adrb2,Comt,Dbh,Maob,Pdyn,Penk,Pnoc
	Neurotrophins		Bdnf,Gdnf,Ngf,Ntrk1.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.