产品介绍：

    帕金森病（PD）是一种进行性神经退行性运动障碍，主要由黑质致密部（SNc）多巴胺能（DA）神经元的死亡引起。环境因素和家族性帕金森病相关基因如SNCA、Parkin、DJ-1、PINK1和LRRK2的突变都与帕金森病的发病机制有关。已知这些致病性突变和环境因素会因氧化应激、细胞内Ca2+稳态损伤、线粒体功能障碍和蛋白质处理改变而导致疾病，从而损害DA神经元功能和生存的关键作用。位于SNc的DA神经元的死亡导致纹状体的多巴胺能输入下降，据推测，纹状体通过分别诱导基底神经节中直接（dSPNs）和间接（iSPNs）通路的纹状体棘突神经元（SPN）的低活性和高活性来阻碍运动。

    WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Parkinson's Disease PCR Array plate
种    属：	HUMAN
货    号：	WC-MRNA0122-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

HUMAN

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ALDH1A1

CADPS

CDC42

EGLN1

GPR37

MAPK9

OPA1

PTEN

SLC41A1

SV2B

UBA1

VDAC3

B

APC

CASP1

CDH8

FBXO2

GRIA3

MAPT

PAN2

RGS4

SLC45A3

SYNGR3

UBB

YWHAZ

C

APP

CASP2

CHGB

FBXO7

HSPA4

NCOA1

PARK2

RTN1

SLC6A3

SYT1

UBE2I

PSEN2

D

ATP2B2

CASP3

CUL2

FBXO9

HTR2A

NFASC

PARK7

S100B

SLIT1

SYT11

UBE2K

SLC25A4

E

ATXN2

CASP7

CXXC1

FGF13

KCNJ6

NR4A2

PINK1

SEPT5

SNCA

TBP

UBE2L3

STUB1

F

ATXN3

CASP8

DDC

FN1

LRRK2

NRXN3

PPID

SKP1

SPEN

TCF7L2

UCHL1

TPBG

G

BASP1

CASP9

DLK1

GABBR2

MAPK11

NSF

PRDX2

SLC18A2

SRSF7

TH

USP34

VAMP1

H

BDNF

CDC27

DRD2

GBE1

MAPK12

NTRK2

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（human）			相关基因
Parkin Complex			HSPA4 (HSP70),PARK7,STUB1.
Parkin Substrate			ATXN2,ATXN3,GPR37,SYT11.
CellAdhesionMolecules			APC,APP,CDH8,FN1,NFASC,NRXN3,PTEN,TPBG.
Ubiquitination			CDC27,CUL2,FBXO9,LRRK2,PAN2,PINK1,PRKN,SKP1,STUB1,UBA1,UBB,UBE2I,UBE2K,UBE2L3 ,UCHL1,USP34
Inflammation			FN1,PRDX2,YWHAZ.
Apoptosis	Pro-Apoptotic		APC,APP,CASP1 (ICE),CASP3,CASP8 (FLICE),CASP9,CUL2,MAPK9 (JNK2),PSEN2,PTEN.
	Anti-Apoptotic		APC,BDNF,CASP3,CASP9,NEFL,NR4A2 (NURR1),OPA1,PPID,PRDX2,PSEN2,PTEN,SLC25A4,S NCA,TCF7L2,UBB,YWHAZ.
Mitochondrial Genes			CASP3,CASP7,CASP8 (FLICE),HSPA4 (HSP70),LRRK2,NEFL,OPA1,PARK7,PINK1,PTEN, SLC25A4,SNCA,TH,UCHL1,VAMP1,VDAC3,YWHAZ
Synaptic Vesicles			LRRK2,SEPT5,SV2B,SYNGR3,SYT1,SYT11,TH.
SignalTransduction		DopaminergicSignaling	DDC,DRD2,HTR2A,NR4A2 (NURR1),NSG1,PARK7,PINK1,PRKN,SEPT5,SLC6A3 (DAT),SNCA,TH.
		GABAergic Signaling	DRD2,GABBR2.
		MAP Kinase Signaling	APC,FGF13,MAPK9 (JNK2),PRDX2,RGS4.
		Notch Signaling	APP,PSEN2,SPEN.
Cytoskeleton Regulators			APC,CDC42,MAPT,NEFL,PRKN.
Ion Transport			ATP2B2,CADPS,CXXC1,DRD2,EGLN1,GBE1,GRIA3,HTR2A,KCNJ6,NSF,PSEN2,S100B,SLIT1, SNCA,SRSF7,VDAC3.
Transporters			ATP2B2.
Channels &Transporters			GRIA3,SLC18A2 (VMAT2),SLC25A4,SLC6A3 (DAT),SV2B,SYT1,SYT11,VDAC3.
Other Parkinson's DiseaseGenes			ALDH1A1 (RALDH1),BASP1,CHGB,DLK1,NCOA1,NTRK2,RTN1.

帕金森通路图：

图片来源于：https://www.kegg.jp/pathway/map05012

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.