产品介绍：

吞噬作用是巨噬细胞、树突状细胞和其他髓样吞噬细胞内化不同颗粒靶点的过程。在某些情况下，天然免疫细胞吸收并破坏病原菌、凋亡细胞和其他大颗粒。在其他情况下，来自这些颗粒的肽抗原被保存以与主要组织相容性复合体（MHC）I类或II类相关刺激破坏抗原特异性T细胞的分子。广泛研究了靶点与吞噬细胞结合、吞噬到吞噬体和吞噬体中加工的分子和细胞事件。在这两种情况下，吞噬过程都向髓系吞噬细胞提供有关被吞噬目标性质的信息，并有助于调整免疫反应。

沃吉基因吞噬细胞PCR阵列包含了与吞噬、识别和吞噬颗粒靶、吞噬体成熟和信号转导的受体，以及用于表征模型系统中吞噬过程的细胞因子和趋化因子等关键的90个基因。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Phagocytosis PCR Array plate
种    属：	RAT
货    号：	WC-MRNA0121-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

RAT

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Adipoq

Cd44

Crk

Elmo1

Ifng

Itgb2

Mif

Pip5k1a

Rab7

Scarb1

Tbp

Was

B

Ager

Cd47

Crp

Fas

IL10

LTBR

Msn

Pla2g4a

Rab7a

Serpine1

Tgm2

Wnt5a

C

Anxa1

Ceacam3

Csf1

Fcer1g

IL1B

Lyn

Myd88

Pla2g5

Rac1

Sftpd

Tlr3

Pik3cb

D

Axl

Clec7a

Csf2

Fcgr1

Il1rl1

Mapk14

Nod1

Pld1

Rac2

Siglec1

Tlr9

Pten

E

C3

Clic4

Csk

Fcgr1a

IL2

Marco

Nod2

Pld2

Rala

Sirpa

Tnf

Rhoa

F

Calr

Cnn1

Cyp2s1

Fcgr2b

IL6

Mcoln3

NOD2

Prkce

Ralb

Stab2

Tnfsf11

Syk

G

Cd14

Cnn3

Dock1

Fyn

Itgam

Mertk

Pecam1

Pros1

Rapgef3

Stx18

Vamp7

Vav1

H

Cd36

Colec12

Dock2

Gulp1

Itgav

Mfge8

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）	相关基因
参与吞噬作用的受体	Cd14、Cd36、Clec7a、Colec12、Crp、Fas、Fcer1g、Fcgr1a、Fcgr2b、Il1rl1、Itgam、Itgav、Itgb2、Marco、Mfge8、Myd88、Pecam1、Tlr3、Tlr9
识别和吞没	Anxa1、C3、Cd44、Cd47、Ceacam3、Crk、Csf1（Mcsf）、Csf2、Elmo1、Gulp1、Ifng、Mcoln3、Mif、Scarb1、 Siglec1、Sirpa、Tnf、Wnt5a。
吞噬体成熟	Cnn1、Cnn3、Pld1、Rab7a、Stx18、Vamp7
吞噬体处理	Calr、Cyp2s1、Nod1、Nod2、Pla2g4a、Pla2g5、Pld2、Serpine1、Sftpd、Stab2、Tgm2、Tnfsf11
信号转导	Adipoq、Axl、Clic4、Csk、Dock1、Dock2、Fyn、Lyn、Mapk14、Mertk、Msn、Pik3cb、Pip5k1a、Prkce、Pros1、Pten、Rac1、Rac2、Rala、Ralb、Rapgef3、Rhoa、Syk、Vav1

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.