产品介绍：

PAR家族是一类G蛋白偶联受体，其通过蛋白水解切割其细胞外结构域而被激活。凝血酶（F2）激活PAR1，PAR2和PAR4，而胰蛋白酶激活PAR3。然而，这4种受体也可以被几种其他蛋白酶激活。每种酶切割受体上的特定位点，导致不同的下游反应。激活PAR信号传导的大多数蛋白酶在止血或血凝块的形成和降解中起重要作用。已经鉴定了这些蛋白酶中的一些的特异性PAR信号传导途径和应答，例如组织因子（F3），活化蛋白C（PROC），因子VIIa（F7）和因子Xa（F10）。PAR信号传导还与其他细胞受体交叉对话，例如EPCR（PROCR），TLR4和S1PR3。已经在多种细胞类型中鉴定了这些信号传导途径，影响生物过程，例如粘附，增殖和迁移。PAR信号传导失调可能参与癌症进展。此外，癌症患者通常被诊断患有凝血病，这是由PAR配体或参与止血的靶基因失调引起的。PAR信号传导靶基因还包括调节炎症反应的细胞因子和其他蛋白质，以及血管生成基因。该阵列包括参与PAR信号传导的配体和受体，以及针对特定PAR信号传导途径鉴定的下游效应子和靶基因。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Protease Activated Receptor Signaling PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	wc-mRNA0131-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表 

rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Adcy7

Akt1

Ccl12

Ccnd2

Cd44

Cd55

Cdkn1a

Csf1

Csf2

Ctgf

Ctsg

Cxcl3

B

Cyr61（ccn1）

Dkk1

Egr1

Elk1

Ets1

F10

F2

F2r

F2rl1

F2rl2

F2rl3

F3

C

F7

Gata2

Gja1

Gnai1

Hbegf

Hmgcr

Hras

Hspa5

Icam1

Ikbkb

Il10

Il13

D

Il1b

Il4

Il6

Itgam

Itgav

Itgb1

Junb

Kdr

Kitlg

Map2k1

Mapk14

Mif

E

Mmp1

Mmp2

Nab2

Nfkb1

Nr4a1

Plau

Plaur

Plek

Plg

Prkca

Prkce

Proc

F

Procr

Ptgs2

Ptk2

Ptpn11

Rdh1（rdh5）

Rel

Rela

Rhoa

Rhob

Rhoh

Rps6kb1

S1pr1

G

S1pr3

Sele

Selp

Serpinb2

Serpinb5

Serpine1

Src

Tbp

Tfpi

Tgfb1

Thbd

Thbs1

H

Tnf

Tp53

Umpk（uck2）

Vcam1

Vegfa

Vegfc

Actb

Gapdh

Hprt1

Ubb

NTC

NTC

 

基因分类（Rat）			相关基因
蛋白酶激活受体（PARs）			F2r,F2rl1,F2rl2,F2rl3
蛋白酶激活蛋白酶激活受体			Ctsg,F10,F2 ,F3,F7,Mmp1,Plg,Proc.
凝血酶信号		凝血酶和受体	F2 ,F2r,F2rl1,F2rl2,F2rl3.
		凝血酶下游信号	Adcy7,Akt1,Gnai1,Ikbkb,Map2k1,Mapk14,Prkca,Prkce,Ptk2,Rhoa,Rhoh,Rps6kb1,Src.
		转录因子	Egr1,Elk1,Gata2,Nfkb1,Rel,Rela.
细胞粘附分子			Icam1,Itgam,Itgav,Itgb1,Kitlg,Rhoa,Rhoh,S1pr1,Sele,Selp,Src,Thbs1,Vcam1.
凝血			F10,F2,F2r,F2rl1,F2rl2,F2rl3,F3,F7,Hspa5,Mmp1,Plau,Plaur,Plek,Plg,Proc,Procr,Selp,Serpinb2,Serpine1, Tfpi,Thbd,Thbs1
PAR调节的基因	活化蛋白C信号		Cd55,Dkk1,Ets1,F3,Hbegf,Il6,Itgav,Junb,Nr4a1,Plaur,Ptgs2,Ptpn11,Rela,Serpinb2,Thbs1,Tp53,Vegfa.
	凝血酶信号		Ccl12,Cd55,Dkk1,Ets1,F3,Hbegf,Hmgcr,Il1b,Il6,Junb,Kdr,Kitlg ,Mif ,Nab2,Nr4a1,Plaur,Ptgs2 ,Ptpn11, S1pr3 ,Serpinb2 ,Thbs1 ,Tnf,Vegfa.
	因子VIIa/PAR1/2信号		Ccn2,Cdkn1a ,Csf2 ,Nfkb1,Plau ,Serpine1
	因子VIIa/PAR2信号		Csf1,Csf2,Cxcl3,Itgb1,Vegfc.
	TLR4/PAR2信号		Il10,Il13,Il4,Il6,Tnf.
其他PAR调节基因			Gja1,Mmp2,Sele,Selp,Serpinb5,Tgfb1,Vcam1.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.