产品介绍：

通过逆转由蛋白激酶介导的关键调节蛋白的磷酸化，磷酸酶作为激酶的非常重要的补体并减弱活化的信号转导途径。该阵列上的基因类别包括受体和非受体酪氨酸磷酸酶，三个主要蛋白磷酸酶基因家族的催化亚基，双特异性磷酸酶以及细胞周期调节和其他蛋白磷酸酶。磷酸酶活性的改变，包括由基因表达变化引起的那些与中枢神经系统和代谢紊乱，传染病和癌症有关。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Protein Phosphatases PCR Array plate
种    属：	MOUSE
货    号：	WC-MRNA0130-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

MOUSE

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Acp1

Dusp1

Dusp23

Dusp9

Ppm1d

Ppp3cb

Ptpla

Ptpn22

Ptpra

Ptprj

Ptprt

Tenc1

B

Acp2

Dusp10

Dusp26

Ilkap

Ppm1f

Ppp3cc

Ptpn1

Ptpn23

Ptprb

Ptprk

Ptpru

Tpte

C

Cdc14a

Dusp12

Dusp3

MEG2

Ppm1g

Ppp4c

Ptpn11

Ptpn3

Ptprc

Ptprm

Ptprz1

Ptpn21

D

Cdc14b

DUSP13A

Dusp4

Pdp1

Ppp1ca

Ppp5c

Ptpn12

Ptpn4

Ptprd

Ptprn

SHP1

Ptpn9

E

Cdc25a

DUSP13B

Dusp5

Phlpp1

Ppp1cb

Pten

Ptpn13

Ptpn5

Ptpre

Ptprn2

SHP2

Ptprh

F

Cdc25b

Dusp14

Dusp6

Ppef1

Ppp2ca

Ptp4a1

Ptpn14

Ptpn6

Ptprf

Ptpro

Ssh1

Ptprs

G

Cdc25c

Dusp16

Dusp7

Ppm1a

Ppp2cb

Ptp4a2

Ptpn2

Ptpn7

Ptprg

Ptprr

Ssu72

Tbp

H

Cdkn3

Dusp22

Dusp8

Ppm1b

Ppp3ca

Ptp4a3

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Mouse）		相关基因
蛋白质酪氨酸磷酸酶类	受体型酪氨酸磷酸酶	Ptpra,Ptprb,Ptprc,Ptprd,Ptpre,Ptprf,Ptprg,Ptprh,Ptprj,Ptprk,Ptprm,Ptprn,Ptprn2,Ptpro,Ptprr,Ptprs,Ptprt,Ptpru,Ptprz1.
	非-受体型酪氨酸磷酸酶	Ptpn1,Ptpn11,Ptpn12,Ptpn13,Ptpn14,Ptpn2,Ptpn21,Ptpn22,Ptpn23,Ptpn3,Ptpn4,Ptpn5,Ptpn6,Ptpn7,Ptpn9.
其他蛋白质酪氨酸磷酸酶类		Ptp4a1,Ptp4a2,Ptp4a3.
蛋白磷酸酶（催化亚基）		Pdp1,Ppm1a,Ppm1b,Ppm1d,Ppm1f,Ppm1g,Ppp1ca,Ppp1cb,Ppp2ca,Ppp2cb,Ppp3ca,Ppp3cb,Ppp3cc, Ppp4c,Ppp5c.
双特异性磷酸酶		Dusp1,Dusp10,Dusp12,Dusp14,Dusp16,Dusp22,Dusp23,Dusp26,Dusp3,Dusp4,Dusp5,Dusp6,Dusp7, Dusp8,Dusp9.
细胞周期磷酸酶		Cdc14a,Cdc14b,Cdc25a,Cdc25b,Cdc25c,Cdkn3.
其他蛋白磷酸酶		Acp1,Acp2,Ilkap,Phlpp1,Ppef1,Pten,Ssh1,Ssu72,Tpte.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.