产品介绍：

       细胞焦亡是由炎症小体组装介导的，伴随着GSDMD裂解和IL-1β和IL-18的释放。炎症小体是多分子复合物，当宿主对微生物感染有抵抗力时会被激活，也促进适应性的发展免疫反应。此外，炎症小体还与非微生物疾病有关。炎性体的组装始于细胞溶质模式识别受体（PRR，也称为炎性体传感器），它们是能够识别病原体相关分子模式和危险相关分子模式（PAMPs 和 DAMPs）。PRRs的激活促进下游信号通路并导致I型干扰素的产生和促炎细胞因子的释放。PRRs与pro-caspase-1和ASC在细菌和病毒等信号分子刺激细胞后形成炎性体。

       在经典途径中，PAMPs和DAMPs接受细胞内信号分子刺激并与pro-caspase-1和ASC组装形成炎症小体和活性caspase-1。Cleaved-caspase-1裂解GSDMD和pro-IL-1β/18。N-GSDMD通过形成非选择性孔来穿透细胞膜，进一步导致水流入、裂解和死亡。此外，IL-1β和IL-18是从N-GSDMD形成的孔中分泌出来的。

       在非经典途径中，胞质LPS激活caspase-4/5和caspase-11，通过裂解GSDMD触发细胞焦亡。然而，oxPAPC与LPS竞争结合caspase-4/1，从而抑制细胞焦亡。此外，GSDMD的切割导致K+外流，最终介导NLRP3炎性体的组装，导致pro-IL-1β和pro-IL-18的切割。活化的caspase-11还裂解Pannexin-1，诱导ATP释放和P2X7R相关的细胞焦亡。在caspase-3介导的通路中，活性caspase-3裂解GSDME 形成N-GSDME，诱导细胞焦亡。在caspase-8介导的通路中，抑制TAK1会诱导caspase-8的激活，后者裂解GSDMD，导致细胞焦亡。此外，在缺氧条件下，PD-L1被转移到细胞核，与p-Stat3一起调节 GSDMC的转录，导致TNFα激活caspase-8后细胞凋亡转化为细胞焦亡。在颗粒酶介导的通路中，CAR T细胞通过释放GzmB迅速激活靶细胞中的caspase-3，然后GSDME被激活，引起广泛的细胞焦亡。此外，细胞毒性淋巴细胞中的GzmA和GzmB通过穿孔素进入靶细胞并诱导细胞焦亡。GzmA水解GSDMB，GzmB直接激活GSDME。

产品内容：

品名：	Pyroptotic PCR Array
种属：	Human
货号：	wc-mRNA0275-H
规格：	96孔板
品牌：	WCGENE ® biotech
产品：	96孔引物预制板，封板膜，说明书
储存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

                                                                                                                      

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AIM2

CARD18

CASP14

CASP7

DHX9

GSDMB

IFI16

IL37

NLRC4

NLRP9

PYRIN

TNF

B

APIP

CARD8

CASP3

CASP9

ELAVL1

GSDMC

IL18

IL6

NLRP1

NOD1

RIG-1

TOM20

C

PYCARD

CASP1

CASP4

DFNA5

GBP1

GSDMD

IL1B

MEK

NLRP3

PELP1

TLR4

ZBP1

D

BAX

CASP11

CASP5

DFNB59

GSDMA

HMGB1

PLCG1

NAIP

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

E

AIM2

CARD18

CASP14

CASP7

DHX9

GSDMB

IFI16

IL37

NLRC4

NLRP9

PYRIN

TNF

F

APIP

CARD8

CASP3

CASP9

ELAVL1

GSDMC

IL18

IL6

NLRP1

NOD1

RIG-1

TOM20

G

PYCARD

CASP1

CASP4

DFNA5

GBP1

GSDMD

IL1B

MEK

NLRP3

PELP1

TLR4

ZBP1

H

BAX

CASP11

CASP5

DFNB59

GSDMA

HMGB1

PLCG1

NAIP

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

基因分类（Human）	相关基因
细胞焦亡效应分子	GSDMA,GSDMC,GSDMD,GSDME.
促炎细胞因子	IL18,IL1b,IL6.
促炎cASPase:	CASP1,CASP3,CASP4,CASP7,CASP9,CASP14.
炎症小体感受器:	AIM2,NLRP1,NLRP3,NLRP9,

细胞焦亡的分子机制

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.