产品介绍

       Ras蛋白是GTP酶，其作为信号通路的分子开关，调节细胞增殖、存活、生长、迁移、分化或细胞骨架动力学。Ras蛋白通过在非活性GDP结合状态和活性GTP结合状态之间循环来转导来自细胞外生长因子的信号。RAS上GTP与GDP的交换受鸟嘌呤核苷酸交换因子（GEFs）和GTP酶激活蛋白（GAPs）的调节。激活的RAS（RAS-GTP）通过包括Raf、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和Ral鸟嘌呤核苷酸解离刺激因子（RALGDS）在内的效应物调节多种细胞功能。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	RAS Pathway PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0176-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACTA1

ARHGEF2

EGF

GRB2

JUN

MAP2K4

MAPK6

PAK4

PLD1

RALB

RHOG

VEGFA

B

ACTA2

ARHGEF6

EGFR

HRAS

KDR

MAP2K6

MAPK7

PAK7

PLD2

RALBP1

RND3

VEGFC

C

ACTG1

ARHGEF7

ELK1

IGF1R

KIT

MAP2K7

MAPK8

PIK3CA

PLD3

RALGDS

RRAS

PAK3

D

ACTG2

ATF2

ERBB2

ITGA2B

KRAS

MAP3K1

MAPK9

PIK3CB

RAC1

RAP1A

RRAS2

PLCE1

E

ARAF

BRAF

FGF1

ITGAV

LCK

MAPK1

NRAS

PIK3CD

RAC2

RASA1

SHC1

RALA

F

ARHGAP5

CD247

FGF2

ITGB1

MAP2K1

MAPK10

PAK1

PIK3R1

RAC3

RHOA

SHC3

RHOC

G

ARHGEF1

CD3E

FOS

ITGB2

MAP2K2

MAPK12

PAK2

PIK3R2

RAF1

RHOB

SOS1

SOS2

H

ARHGEF11

CDC42

GPLD1

ITGB3

MAP2K3

MAPK3

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

RAS通路图：

        图片来源于：https://www.genome.jp/kegg-bin/show_pathway?map04014

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.