产品介绍

路径描述

      Rho是小GTP结合蛋白Ras超家族的一员，在各种生物过程中发挥核心作用，如肌动蛋白细胞骨架组织、微管动力学、基因转录、致癌转化、细胞周期进展、粘附和上皮伤口修复。迄今为止，在人类基因组中已经鉴定出20个编码Rho家族不同成员的基因，每个基因都充当着控制不同生物化学途径的分子开关。哺乳动物RhoGTPase家族目前由三个亚科组成，Rho（RhoA、RhoB和RhoC）、Rac（Rac1、Rac2和Rac3）和CDC42（细胞分裂周期-42）（CDC42Hs和G25K）。Rho蛋白在活性GTP结合状态和非活性GDP结合状态之间循环。它们的激活状态由调节蛋白控制，如GEFs（鸟嘌呤交换因子），其催化GDP与GTP的交换，从而激活Rho，GDIs（鸟嘌呤解离抑制剂），其抑制GDP的释放，使Rho保持非活性，GAPs（GTP酶激活蛋白），其增加Rho水解GTP的速率，从而失活。虽然导致细胞外信号激活Rho家族蛋白的事件的总体序列是已知的，但这些途径的分子细节仍存在缺口，是深入研究的领域。RhoA被多种生长因子、细胞因子、粘附分子、激素、整合素、G蛋白和其他生物活性物质激活。RhoA的主要激活剂是GPCR（G蛋白偶联受体）。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	RHOA Pathway PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0196-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACTA1

ARHGAP5

ARHGEF4

CDC42EP3

EPHA1

IGF1R

MCF2L

MYH7

MYO9B

PIP5K1B

PTK2B

SLC9A1

B

ACTA2

ARHGDIA

ARHGEF5

CDC42EP4

EZR

IGF2

MRLC2

MYH9

NET1

PIP5K1C

RDX

TLN1

C

ACTG1

ARHGDIB

ARHGEF6

CDC42EP5

GNA11

KTN1

MSN

MYL2

NGEF

PKN1

RHOA

MYH6

D

ACTG2

ARHGEF1

ARHGEF7

CFL1

GNA12

LIMK1

MYBPH

MYL9

PFN1

PLD1

RHPN1

MYO7A

E

ACTR2

ARHGEF11

ARHGEF9

CFL2

GNAI1

LIMK2

MYH1

MYLK

PFN2

PPAP2B

RHPN2

PIP5K1A

F

ACTR3

ARHGEF12

BAIAP2

CHN1

GNAI2

LPAR1

MYH10

MYO5A

PIP4K2A

PPP1R12A

ROCK1

PTK2

G

ARHGAP1

ARHGEF2

CDC42EP1

CHN2

GNAI3

LPAR2

MYH11

MYO6

PIP4K2B

PPP1R12B

ROCK2

RTKN

H

ARHGAP4

ARHGEF3

CDC42EP2

CIT

IGF1

LPAR3

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.