产品介绍：

      肾细胞癌症（RCC）约占人类恶性肿瘤的3%，其发病率似乎正在上升。尽管大多数肾癌病例似乎是零星发生的，但遗传性癌症倾向占1-4%。肾细胞癌不是一种单一的疾病，它有几种形态亚型。常规RCC（透明细胞RCC）约占80%的病例，其次是乳头状RCC（10-15%）、嫌色性RCC（5%）和集合管RCC（<1%）。可能参与每种特定类型散发性肿瘤的基因分别为VHL、MET、BHD和FH。在缺乏VHL的情况下，缺氧诱导因子α（HIFα）积累，导致几种生长因子的产生，包括血管内皮生长因子和血小板衍生生长因子。活化的MET介导许多生物学效应，包括运动性、细胞外基质的侵袭、细胞转化、细胞凋亡和转移形成的预防。功能性FH的丧失导致富马酸盐在细胞中积聚，触发HPH的抑制并阻止pVHL介导的HIFα的靶向降解。BHD突变导致Birt-Hogg-Dube综合征及其相关的嫌色细胞、混合嗜酸细胞和常规（透明细胞）RCC。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Renal Cell Carcinoma PCR Array
种    属：	HUMAN
货    号：	WC-MRNA0356-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

HUMAN

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AKT1

APEH

ARAF

ARNT

ARNT2

ASPSCR1

BRAF

CA9

CAV1

CDC42

CDH16

CLDN8

B

CREBBP

CRK

CRKL

CSF2

CUL2

DIRC2

DNAJB8

EGFR

EGLN1

EGLN2

EGLN3

EP300

C

EPAS1

EPCAM

ETS1

FAM107A

Ferritin

FGF

FH

FHIT

FIGF

FLCN

GAB1

GAL3ST1

D

GRB2

HGF

HNF1A

JUN

KANK1

KDR

KIT

KRAS

KRT7

MAP2K2

MAPK1

MAPK3

E

MET

MME

MOK

MUC1

NRAS

OGG1

PAK1

PAK2

PAK3

PAK4

PAK6

PAK7

F

PAX8

PBRM1

PCNA

PDGFB

PDGFRB

PIK3CA

PIK3R1

PIK3R5

PRCC

PSMB9

PTPN11

RAC1

G

RAF1

RAP1A

RAP1B

RAPGEF1

RBX1

RNF139

S100A1

SLC2A1

SOS1

SOS2

TCEB1

TCEB2

H

TFE3

TGFA

TGFB1

VEGFA

VHL

VIM

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

肾细胞癌通路图：

图片来源于：https://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?map05211

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.