产品介绍

路径描述

      小GTP结合蛋白的Rho家族包括一组信号分子，这些信号分子被多种生长因子、细胞因子、粘附分子、激素、整合素、G蛋白和其他生物活性物质激活，并调节广泛的生物过程，包括肌动蛋白细胞骨架的重组、转录调节、囊泡运输，形态发生、中性粒细胞活化、吞噬和活化、有丝分裂、细胞凋亡和肿瘤发生。哺乳动物Rho-GTPase家族目前由三个亚科组成，Rho（RhoA、RhoB和RhoC）、Rac（Rac1、Rac2和Rac3）和CDC42（细胞分裂周期-42）（CDC42Hs和G25K）。Rho家族GTP酶最具特征的家族成员是RhoA、Rac1和CDC42。每一种都控制着哺乳动物细胞中不同细胞骨架元件的形成。Rac的激活诱导肌动蛋白聚合形成纤网足（宽网状延伸），而CDC42的激活刺激肌动蛋白聚合为丝足或微棘（长而细的延伸）。相反，Rho调节肌动蛋白丝向应力纤维的捆绑和局灶性粘附复合物的形成。Rho家族的小GTP酶充当分子开关，在活性GTP结合状态和非活性GDP结合状态之间循环，这一过程由GEFs（鸟嘌呤核苷酸交换因子）调节，GEFs催化转化为GTP结合。此外，GDI（GDP解离抑制剂）已被描述为在GTP和GDP结合状态下捕获Rho，并使其在胞质溶胶和膜之间循环。在其活性状态下，Rho GTP酶与其特定的下游靶标相互作用并执行其细胞功能。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Rho GTPase Signaling PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0212-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ABL1

ARHGEF1

ARHGEF7

CHN1

FAM13A

GSK3B

LPAR1

MYH7

PRKACA

SH3BP1

STAT3

VAV1

B

AKT1

ARHGEF11

ARHGEF9

CHN2

FAM13B

HMHA1

LPAR2

MYH9

PTEN

SPRED1

STMN1

WASF1

C

APC

ARHGEF12

AURKB

CLASP1

GMIP

IGF1

MAP1B

MYL2

RAC1

SRC

STMN2

MYH6

D

ARHGAP1

ARHGEF2

CAMK1

CLASP2

GNA11

IGF1R

MARK2

MYL9

RHOA

SRGAP1

TESK2

pi3k

E

ARHGAP4

ARHGEF3

CDC42

DLC1

GNA12

IGF2

MYH1

OPHN1

RHPN1

SRGAP2

TIAM1

ROCK2

F

ARHGAP5

ARHGEF4

CDK1

DVL1

GNAI1

jun

MYH10

PAK1

RHPN2

SRGAP3

TLN1

STARD8

G

ARHGAP6

ARHGEF5

CFL1

EB1

GNAI2

LIMK1

MYH11

PAR1

ROCK1

STARD13

TPPP

TRIO

H

ARHGAP8

ARHGEF6

CFL2

ERK

GNAI3

LIMK2

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.