产品介绍

      SMADs是已知具有信号功能的TβRI激酶的底物，最初被认为是果蝇Mad和秀丽隐杆线虫Sma基因的产物，它们位于这些生物体中BMP类似配体受体系统的下游。SMAD在整个发育过程中和所有成年组织中普遍表达，其中许多是由选择性剪接的mRNA产生的。SMAD蛋白涉及细胞内TGF-β信号传导。根据其功能，SMAD家族的成员可分为三组：1）受体调节的SMAD（R-SMAD），包括SMAD1、SMAD2、SMAD3、SMAD5和SMAD8；2） 公共SMAD（Co-SMAD），其中只有一个成员SMAD4；3） 包括SMAD6和SMAD7的抑制性SMAD（I-SMAD）。R-SMAD与膜结合的丝氨酸/苏氨酸受体结合，并被其激酶活性激活。作为一种协同因子，co-SMAD与活化的R-SMAD结合，形成一种复合物，并转移到细胞核中。I-SMADs抵消R-SMADs的作用，从而通过各种机制对TGF-β超家族信号传导产生抑制作用。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	SMAD Pathway PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0197-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

MOUSE

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACTA1

BMP2

CTBP2

HDAC1

HDAC7

PSMA3

PSMB9

RAB5C

SMAD3

TGFB2

UBE3A

XPO1

B

ACTA2

BMP3

DAB2

HDAC10

HDAC8

PSMA4

PSMC2

RAN

SMAD4

TGFB3

UBE3B

ZFYVE9

C

ACTG1

BMP4

EP300

HDAC11

HDAC9

PSMA6

PSMC3

RNF8

SMAD7

TGFBR1

UBE3C

RAB5B

D

ACTG2

BMP5

FLNA

HDAC2

HECW1

PSMA7

PSMC4

SIN3A

SMURF1

TGFBR2

UBR1

SMAD2

E

AXIN1

BMP6

FLNB

HDAC3

ITCH

PSMB10

PSMC5

SIN3B

SMURF2

TGFBRAP1

UBR2

TGFB1

F

BMP1

BMP7

FLNC

HDAC4

KPNB1

PSMB4

PSMD4

SKI

SNX6

TGIF1

UBR5

UBD

G

BMP10

CREBBP

FOXH1

HDAC5

LEFTY2

PSMB5

RAB5A

SKIL

STUB1

UBC

WWP1

WWP2

H

BMP15

CTBP1

HACE1

HDAC6

PSMA2

PSMB8

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.