产品介绍

描述

       细胞信号传导形成了一个复杂的基因相互作用网络，涉及多种信号转导途径。每个途径最终都会增加或减少其靶基因的表达导致细胞过程的改变。目标的变化基因表达提示信号通路激活或抑制。然而，基因同一途径中的表达结果差异很大，这取决于模型系统和实验条件。因此，每个途径的多个靶基因应该检查以确保在各种模型中准确识别信号通路系统。此外，分析多种途径同时测试信号传导通路串扰。该阵列包括10个常用研究信号的靶基因转导途径，代谢和应激激活过程。使用此阵列获得的结果可以表明可能被实验刺激激活或抑制的途径后续研究。使用实时PCR，研究可以轻松可靠地分析利用该阵列参与细胞信号传导的一组聚焦基因的表达。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Signal Transduction PathwayFinder PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0134-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACSL3

AXIN2

BMP2

CDKN1B

EPO

GADD45B

HEY1

IL6

NOTCH1

SLC27A4

TNFSF10

WNT5A

B

ACSL4

BAX

BMP4

CEBPD

FABP1

GATA3

HEY2

IRF1

NQO1

SLC2A1

TXN

WNT6

C

ACSL5

BBC3

BTG2

CPT2

FAS

GCLC

HEYL

JAG1

OLR1

SOCS3

TXNRD1

IFRD1

D

ADM

BCL2

CA9

CSF1

FCER2

GCLM

HMOX1

LFNG

PCNA

SORBS1

VEGFA

MYC

E

ANGPT1

BCL2A1

CCL5

CXCL8

FOS

GSR

ICAM1

LRG1

PPARD

SQSTM1

WISP1

SERPINE1

F

ANGPT2

BCL2L1

CCND1

DAB2

FOSL1

HERPUD1

ID1

MCL1

PTCH1

STAT1

WNT1

TNF

G

ARNT

BIRC3

CCND2

EGFR

FTH1

HES1

IFNG

MMP7

RB1

TBP

WNT2B

WNT3A

H

ATF4

BIRC5

CDKN1A

EMP1

GADD45A

HES5

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Human）	相关基因
TGFb信号	ATF4,CDKN1B ,EMP1,GADD45B,HERPUD1,IFRD1,MYC,TNFSF10 .
WNT信号	AXIN2,CCN4,CCND1,CCND2,DAB2,FOSL1 ,MMP7,MYC,PPARD.
NFκB信号	ng：BCL2A1 ,BCL2L1 ,BIRC3 ,CCL5 ,CSF1 ,ICAM1,IFNG,STAT1,TNF.
JAK / STAT信号	IRF1.BCL2L1 ,CCND1,CEBPD,LRG1,MCL1,SOCS3.BCL2L1 ,CCND1,SOCS3.FCER2.GATA3.
p53信号	BAX,BBC3 ,BIRC5,BTG2,CDKN1A ,EGFR ,FAS,GADD45A,PCNA,RB1.
Notch信号	ANGPT1,ANGPT2,HES1,HES5,HEY1,HEY2,HEYL,ID1,JAG1,LFNG,NOTCH1.
Hedgehog信号	BCL2,BMP2,BMP4,PTCH1,WNT1,WNT2B,WNT3A,WNT5A,WNT6.
PPAR信号	ACSL3,ACSL4,ACSL5,CPT2,FABP1,OLR1,SLC27A4,SORBS1.
氧化应激	CXCL8,FTH1,FOS,GCLC,GCLM,IL6,GSR,HMOX1,NQO1,SQSTM1,TXN,TXNRD1.
Hypoxia信号	ADM,ARNT,CA9,EPO,HMOX1,SERPINE1 ,SLC2A1,VEGFA.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.