产品介绍：

      骨骼肌在自主运动中的作用极大地促进了能量代谢及其通过葡萄糖摄取和胰岛素储存的调节。衰老和代谢性疾病如糖尿病和代谢综合征引起的并发症导致肌肉萎缩（萎缩）。然而，最近的研究假设骨骼肌的代谢缺陷导致糖尿病和代谢综合征的病因，这表明骨骼肌在这些疾病状态中的作用比最初预期的要大。大型异质蛋白复合物（包括肌动蛋白或肌营养不良蛋白）通过将骨骼肌细胞骨架连接到细胞外基质来促进肌肉收缩。肌营养不良症是由编码这些复合物成分的基因中的遗传突变引起的，基因表达变化破坏了其正常的收缩功能，从而失调了控制肌肉生长的信号通路。肌肉萎缩的潜在疗法包括产生新的肌肉细胞（肌生成）或增加当前肌肉细胞的质量（肥大）。因此，特定于肌肉的生物学和病理生理过程是相互关联的，不能单独研究。该阵列包括对基本骨骼肌功能，发育和生长重要的基因，以及与代谢综合征和肌肉消瘦的疾病过程相关的基因。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Skeletal Muscle: Myogenesis & Myopathy PCR Array plate
种    属：	HUMAN
货    号：	WC-MRNA0133-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

  基因列表

HUMAN

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACTA1

ATP2A1

CAV1

DMPK

HK2

LEP

MMP9

MYH4

PAX3

PRKAA1

TBP

TTN

B

ACTA3

BCL2

CAV3

DYSF

IGF1

LMNA

MSTN

MYH7

PAX7

PRKAB2

TGFB1

UTRN

C

ACVR2B

BMP4

CRYAB

FBXO32

IGF2

MAPK1

MUSK

MYOD1

PCK1

PRKAG1

TNF

MYH3

D

ADIPOQ

CAMK2G

CS

FGF2

IGFBP3

MAPK14

MYF5

MYOG

PDK4

PRKAG3

TNNC1

NOS2

E

ADRB2

CAPN2

CTNNB1

FOXO1

IGFBP5

MAPK3

MYF6

MYOT

PPARG

RHOA

TNNI2

PPP3CA

F

AGRN

CAPN3

DAG1

FOXO3

IKBKB

MAPK8

MYH1

NEB

PPARGC1A

RPS6KB1

TNNT1

SLC2A4

G

AKT1

CASP3

DES

GDF11

IL1B

MB

MYH2

NFKB1

PPARGC1B

SGCA

TNNT3

TRIM63

H

AKT2

CAST

DMD

HDAC5

IL6

MEF2C

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Human）			相关基因
骨骼肌收缩力	肌营养不良蛋白-糖蛋白复合物		CAMK2G,CAPN3,CAV3,DAG1,DMD,DYSF,LMNA,MAPK1,SGCA.
	Titin复合物		ACTA1,CAPN3,CRYAB,DES,LMNA,MAPK1 ,MSTN,MYH1,MYH2,MYOT,NEB,SGCA,TNNI2,TNNT1,TNNT3, TRIM63,TTN
	能量代谢		CS,HK2,PDK4,SLC2A4.
	快肌纤维		ATP2A1,MYH1,MYH2,TNNI2,TNNT3.
	慢肌纤维		MB,MYH1,TNNC1,TNNT1.
	其他骨骼肌收缩力		DMPK,IKBKB ,RPS6KB1,
骨骼肌生成			ACTA1,ADRB2,AGRN,BCL2,BMP4,CAPN2,CAST,CAV1,CTNNB1,DMD,HDAC5,IGF1,IGFBP3,IGFBP5,MEF2C, MSTN,MUSK,MYF5,MYF6,MYOD1,MYOG,PAX3,PAX7,PPP3CA,RHOA,RPS6KB1,UTRN
骨骼肌肥大			ACTA1,ACVR2B,ADRB2,IGF1,IGFBP5,MSTN,MYF6,MYOD1,RPS6KB1.
骨骼肌自分泌信号			ADIPOQ,FGF2,IGF1,IGF2,IL6,LEP,MSTN,TGFB1.
糖尿病/代谢综合征			ADIPOQ ,LEP,PPARG,PPARGC1A,PPARGC1B,PRKAA1,PRKAB2,PRKAG1,PRKAG3,SLC2A4
骨骼肌萎缩/萎缩		自噬	CAPN2,CASP3,FBXO32,FOXO1,FOXO3,MSTN,NOS2,PPARGC1A,PPARGC1B,RPS6KB1,TRIM63
		营养失调	AKT1,AKT2,FBXO32,IL1B,MAPK1,MAPK14 ,MAPK3,MAPK8,MMP9,NFKB1,TNF,TRIM63,UTRN.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.