产品介绍

路径描述

       精子细胞具有有限的行为，这些行为完全符合其使卵子（成熟卵子）受精的目的。当精子在睾丸中产生时，是不动的；它们在通过哺乳动物的附睾道或从无脊椎动物射精后获得游泳能力。但是，单靠运动能力是不足以将精子引导到卵子的。卵子本身（或相关结构）必须通过释放可扩散的趋化因子和/或通过配体/受体相互作用来“引诱”精子。哺乳动物的精子运动后，它们成熟（这一过程被称为获能），并能够在雌性生殖道内使卵子受精。精子和卵子最初通过表面受体相互作用，然后精子顶体囊泡中的蛋白水解物质被释放。这种蛋白水解混合物有助于精子穿透卵子的外壳，到达卵子的质膜（受精）。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Sperm Motility PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0177-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ADCY1

B4GALT1

CALM3

GABRB2

GNAS

HCN2

MAP3K11

PDE4B

PLA2G7

PRKACA

PRKCD

SLC9A5

B

ADCY10

B4GALT2

CATSPER2

GABRB3

GNAZ

HCN4

NPR1

PDE4C

PLCB1

PRKACB

PRKCE

STK11

C

ADCY3

B4GALT3

CDK7

GABRD

GNB3

ITPR1

NPR2

PDE4D

PLCB2

PRKACG

PRKCQ

PDE4A

D

ADCY5

CACNA1G

CNGA3

GABRG2

GPLD1

ITPR2

PDE1A

PLA2G1B

PLCD1

PRKAR1A

PRKCZ

PLA2G6

E

ADCY6

CACNA1H

CNGB1

GNAI1

GUCY1A3

ITPR3

PDE2A

PLA2G2A

PLCE1

PRKAR2A

PRKG1

PLD1

F

ADCY7

CACNA1I

CNGB3

GNAI2

GUCY2C

KCNK2

PDE3A

PLA2G4A

PLCG1

PRKAR2B

PRKG2

PRKCB

G

AURKA

CALM1

GABRA1

GNAI3

GUCY2D

KCNK3

PDE3B

PLA2G5

PLCG2

PRKCA

PTK2

RPS6KB1

H

AURKB

CALM2

GABRA2

GNAQ

HCN1

KCNK9

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.