产品介绍：

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Stem Cell PCR Array plate
种    属：	RAT
货    号：	WC-MRNA0132-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

RAT

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Abcg2

Ascl2

Ccnd1

Cd8a

Col9a1

Fgf1

GATA2

Igf1

LAMC1

Notch1

Rb1

Tubb3

B

Acan

Axin1

Ccnd2

Cd8b

Cxcl12

Fgf2

GATA6

Ihh

Mme

Notch2

S100b

Wnt1

C

Actc1

Bglap

Ccne1

Cdc42

Dhh

Fgf3

Gdf3

Isl1

Msx1

Numb

Sigmar1

Hspa9

D

Adar

Bmp1

Cd19

Cdh1

Dll1

Fgf4

Gja1

Jag1

Myc

Pard6a

SOX1

LAMB1

E

Aldh1a1

Bmp2

Cd3d

Cdh2

Dll3

FGF8

H19

Kat2a

Myod1

Pdx1

Sox2

NODAL

F

Aldh2

Bmp3

Cd3e

Cdk1

Dtx2

Fgfr1

Hdac1

Krt15

Ncam1

Ppard

SOX6

PTEN

G

Alpi

Btrc

Cd4

Col1a1

Dvl1

Foxa2

Hdac2

KRT18

Neurog2

Pparg

Tbp

Tert

H

Apc

Ccna2

Cd44

Col2a1

Ep300

Fzd1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）		相关基因
干细胞特异性标记	细胞周期的调节	Apc,Axin1,Ccna2,Ccnd1,Ccnd2,Ccne1,Cdc42,Cdk1,Ep300 ,Fgf1,Fgf2,Fgf3,Fgf4,Myc,Notch2,Pard6a,Rb1.
	染色质修饰酶和重塑因子	Hdac1,Hdac2,Kat2a,Kat7,Kat8,Rb1,Tert.
	对称和非对称细胞分裂	Dhh,Ihh,Notch1,Notch2,Numb,Pard6a.
	自我更新标记	Hspa9,Kat7,Kat8,Neurog2,Sox2.
	细胞因子和生长因子	Bmp1,Bmp2,Bmp3,Cxcl12,Fgf1,Fgf2 ,Fgf3,Fgf4,Gdf3 ,Igf1,Jag1,
	细胞信号通讯	Dhh,Dll1,Gja1,Jag1.
	细胞粘附分子	Acan,Apc,Bglap,,Cd4,Cd44,Cdh1,Cdh2,Cxcl12,Ncam1.
	代谢标记	Abcg2,Aldh1a1,Aldh2,Fgfr1.
干细胞分化标记	胚胎细胞谱系标记	Actc1,Ascl2,Foxa2,Isl1,Krt15,Msx1,Myod1,Pdx1,
	造血细胞谱系标记	Cd19,Cd3d,Cd3e,Cd4,Cd8a,Cd8b,Mme.
	间充质细胞谱系标记	Acan,Alpi,Bglap,Col1a1,Col2a1,Col9a1,Pparg.
	神经细胞谱系标记	Cd44,Ncam1,S100b,Sigmar1,Tubb3.
干细胞维持的重要信号通路	Notch信号	Dll1,Dll3,Dtx2,Dvl1,Ep300,Hdac1,Hdac2,Jag1,Kat2a,Notch1,Notch2,Numb.
	WNT信号	Adar,Apc,Axin1,Btrc,Ccnd1,Fzd1,Myc,Ppard,Wnt1.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.