产品介绍：

      暴露于压力或毒素的细胞，无论是体外还是体内，都会根据压力和细胞类型以各种方式作出反应。关键的一线靶器官如心脏，肾脏，肝脏和皮肤必须是能够以适当的方式应对压力诱发或有毒的环境污染。毒理学家使用来自这些器官的培养细胞作为模型系统来确定测试化合物的作用。活性氧引起氧化应激，高温引起热休克。渗透压不平衡和离子通道抑制剂引起渗透压，而蛋白质合成抑制剂激活未折叠的蛋白质反应。应激反应途径经常串扰，特别是在长时间暴露条件下或暴露于多种应激下。例如，炎症诱导应激反应，但是特定的慢性应激源，例如氧化应激和热休克，也诱导炎症。这些压力最终会导致DNA损伤或其他类型细胞损伤，如果不修复可能导致细胞死亡。同时研究这些途径的潜在激活可以识别对细胞有毒的化合物或实验条件，评估细胞对细胞损伤的反应能力，并确定应激反应之间的潜在相互作用。

     WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Stress & Toxicity PathwayFinder PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0135-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Adm

Akr1b3

Aqp1

Aqp2

Aqp4

Arnt

Atf4

Atf6

Atf6b

Atg12

Atg5

Atg7

B

Atm

Atr

Bax

Becn1

Bid

Bnip3l

Calr

Car9

Casp1

Ccl12

Ccl3

Cd40lg

C

Cdkn1a

Cftr

Chek1

Chek2

Crp

Ddb2

Ddit3

Dnajc3

Edn1

Epo

Fas

Fth1

D

Gadd45a

Gadd45g

Gclc

Gclm

Grb2

Gsr

Gstp1

Hmox1

Hsp90aa1

Hsp90b1

Hspa4

Hspa4l

E

Hspa5

Hus1

Ifng

Il1a

Il1b

Il6

Ldha

Mcl1

Mmp9

Mre11a

Nbn

Nfat5

F

Nfkb1

Nqo1

Parp1

Prdx1

Pvr

Rad17

Rad51

Rad9a

Ripk1

Ripk3

Serpine1

Slc2a1

G

Slc5a3

Slc9a3

Sod1

Sod2

Sqstm1

Tbp

Tlr4

Tnf

Tnfrsf10b

Tnfrsf1a

Trp53

Txn1

H

Txnl4b

Txnrd1

Ulk1

Vegfa

Xbp1

Xpc

Actb

Gapdh

Hprt1

B2m

NTC

NTC

基因分类（Mouse）		相关基因
氧化应激		Fth1,Gclc,Gclm,Gsr,Gstp1,Hmox1,Nqo1,Prdx1,Sqstm1,Txn1,Txnrd1
缺氧信号		Adm,Arnt,Bnip3l,Car9,Epo,Hmox1,Mmp9,Serpine1,Slc2a1,Vegfa.
渗透压应激		Akr1b3,Aqp1,Aqp2,Aqp4,Cftr,Edn1,Hspa4l,Nfat5,Slc5a3,Slc9a3.
细胞死亡	细胞凋亡	Casp1,Fas,Mcl1,Ripk1,Tnfrsf10b,Tnfrsf1a .
	自噬	Atg12,Atg5,Atg7,Becn1,Ulk1
	细胞坏死	Fas,Grb2,Parp1,Pvr,Ripk1,Ripk3,Tnfrsf10b,Tnfrsf1a,Txnl4b.
炎症反应		Ccl12,Cd40lg,Crp,Ifng,Il1a,Il1b,Il6,Tlr4,Tnf.
DNA损伤与修复	细胞周期阻滞和检查点	Cdkn1a,Chek1,Chek2,Ddit3 ,Hus1,Mre11a,Nbn,Rad17,Rad9a.
	其他DNA损伤反应	Atm,Atr,Ddb2,Gadd45a,Gadd45g,Rad51,Trp53,Xpc
未折叠蛋白反应		Atf4,Atf6,Atf6b,Bid,Calr,Ddit3 ,Dnajc3,Hsp90aa1,Hsp90b1,Hspa4 ,Hspa5,Xbp1.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.