产品介绍：

       肿瘤坏死因子（TNF）作为一种重要的细胞因子，可以诱导多种细胞内信号通路，包括细胞凋亡和细胞存活以及炎症和免疫。活化的 TNF 组装成同源三聚体并与其受体（TNFR1、TNFR2）结合，导致 TNFR1 或 TNFR2 三聚化。 TNFR1 由几乎所有细胞表达，是 TNF（也称为 TNF-α）的主要受体。相比之下，TNFR2 在有限的细胞中表达，例如 CD4 和 CD8 T 淋巴细胞、内皮细胞、小胶质细胞、少突胶质细胞、神经元亚型、心肌细胞、胸腺细胞和人间充质干细胞。它是 TNF 和 LTA（也称为 TNF-β）的受体。在与配体结合后，TNFR 介导一些衔接蛋白（如 TRADD 或 TRAF2）的结合，进而启动信号转导的募集。 TNFR1 信号传导诱导许多基因的激活，主要受两个不同的途径控制，NF-kappa B 途径和 MAPK 级联，或细胞凋亡和坏死性凋亡。 TNFR2 信号激活 NF-kappa B 通路，包括 PI3K 依赖性 NF-kappa B 通路和导致存活的 JNK 通路。

       沃吉基因肿瘤坏死因子信号通路PCR阵列包含TNF 超家族和 TNF 受体超家族的成员以及参与 TNFR1 和 TNFR2 信号通路的基因关键的90个基因。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	TNF Signaling Pathway PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0149-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AGFG1

CASP2

CHUK

IKBKAP

LTB

NFKBIA

RB1

TNFRSF10C

TNFRSF17

TNFRSF6B

TNFSF14

TRAF2

B

ARHGDIB

CASP3

CRADD

IKBKB

LTBR

NGFR

RELT

TNFRSF10D

TNFRSF18

TNFRSF8

TNFSF15

TRAF3

C

BAG4

CASP8

DFFA

IKBKG

MADD

PAK1

SPTAN1

TNFRSF11A

TNFRSF19

TNFRSF9

TNFSF18

TNFRSF10B

D

BAX

CASP9

DUSP1

JUN

MAP2K4

PAK2

TBP

TNFRSF11B

TNFRSF1A

TNFSF10

TNFSF4

TNFRSF14

E

BCL2

CD27

EDA2R

LMNA

MAP3K1

PARP1

TNF

TNFRSF12A

TNFRSF1B

TNFSF11

TNFSF8

TNFRSF4

F

BCL2L1

CD40

FADD

LMNB1

MAP3K7

PGLYRP1

TNFAIP3

TNFRSF13B

TNFRSF21

TNFSF12

TNFSF9

TNFSF13B

G

CAD

CD40LG

FAS

LMNB2

MAPK8

PRKDC

TNFRSF10A

TNFRSF13C

TNFRSF25

TNFSF13

TRADD

TRAF1

H

CASP10

CD70

FASLG

LTA

NFKB1

PSMG2

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（human）	相关基因
TNF超家族成员	FASLG ,LTA ,TNFSF10 ,TNFSF14,TNFSF8.TNFSF15.TNFSF14.CD40LG,TNF,TNFSF18.CD70,TNFSF9.CD40LG,TNF.FASLG , TNF,TNFSF10 ,TNFSF14,TNFSF15.LTB,PGLYRP1,PSMG2,TNFSF11 ,TNFSF12,TNFSF13,TNFSF13B,TNFSF4 .
TNF受体超家族成员	CD27 ,FAS,TNFRSF10A ,TNFRSF10B ,TNFRSF19,TNFRSF25 ,TNFRSF9,TRADD.TNFRSF10A ,TNFRSF10B .CD27 .CD27 , FAS,TNFRSF10D,TNFRSF18,TNFRSF6B.CD40 ,LTBR,NGFR,TNFRSF10C,TNFRSF11B ,TNFRSF12A,TNFRSF14,TNFRSF1A , TNFRSF1B,TNFRSF21.CD40 ,TNFRSF1A .CD27 ,CD40 ,EDA2R,LTBR,TNFRSF10A ,TNFRSF10B ,TNFRSF1A ,TRADD.CD27 ,EDA2R, TNFRSF19.RELT,TNFRSF11A ,TNFRSF13B,TNFRSF13C,TNFRSF17,TNFRSF4 ,TNFRSF8.
TNFR1 信号转导	BCL2,BCL2L1,CASP3,CRADD,FADD,TRADD.CASP2,CASP3,CASP8 ,CASP9,CASP10,BAG4,CASP2,TNF.DFFA,PAK1,TNFRSF1A , TRAF2.TNF,TNFRSF1A .CASP8 ,FADD,TNF,TNFRSF1A ,TRADD.MAP2K4 ,MAPK8 ,PAK1.JUN,PARP1 ,RB1,TNF,TNFRSF1A .AGFG1, ARHGDIB,CAD,LMNA,LMNB1,LMNB2,MADD,MAP3K1 ,MAP3K7 ,PAK2,PRKDC,SPTAN1.
TNFR2 信号转导	IKBKG,LTA ,TRAF3.NFKB1,TNFAIP3.NFKBIA ,TNFRSF1B,TRAF1,TRAF2.NFKB1.CHUK ,IKBKB ,IKBKG,NFKBIA ,TNFAIP3.IKBKB , IKBKG,NFKB1,NFKBIA .AGFG1,DUSP1 ,MAP3K1 .

TNF-α Signaling Pathway通路图

图片来源于： https://www.genome.jp/pathway/map04668

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.