产品介绍

路径描述

      凝血酶是一种多功能丝氨酸蛋白酶，参与许多病理生理过程，包括凝血、炎症、修复过程和肿瘤转移。在大脑中，凝血酶通过在低血糖和氧化应激条件下增加存活率和在其他条件下诱导细胞凋亡来调节神经元和星形胶质细胞的生存能力。凝血酶对巨噬细胞具有趋化性，对平滑肌细胞、成纤维细胞和星形胶质细胞具有促有丝分裂性，并诱导成纤维细胞及平滑肌细胞分泌生长因子和细胞因子。大多数凝血酶介导的作用之前是PARs（蛋白酶激活受体）激活后细胞的形态学变化。PARs是一类独特的异三聚跨膜GPCR（G蛋白偶联受体），由丝氨酸蛋白酶激活，其切割分子胞外NH2末端的特定区域，以揭开新的NH2末端，该末端作为与受体主体分子内对接的“系留配体”，以实现跨膜信号传导。到目前为止，已经鉴定出三种具有不同N末端切割位点和系链配体药理学的PARs，其中PAR1、PAR3和PAR4被凝血酶激活。虽然PAR1和PAR4是凝血酶的直接细胞靶点（PAR1是最有效的，PAR4作为一种低亲和力凝血酶受体发挥作用，在实现高浓度凝血酶的条件下被激活），但PAR3似乎在其他PARs的激活中发挥作用，但其本身并不直接转导信号。多种G蛋白可以与活化的PARs（PAR1和PAR4）偶联，这决定了细胞对凝血酶反应的多能性。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Thrombin Signaling PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0198-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ADCY6

ARHGEF7

ELK1

GATA3

GNAQ

ITPR1

MAPK12

NRAS

PLCE1

PRKCZ

RHOB

SHC1

B

AKT1

CAMK1

F2

GATA4

GNAS

ITPR2

MAPK13

PIK3CA

PLCG1

PTK2

RHOC

SLC2A4

C

AKT2

CAMK2A

F2R

GATA6

GNB1

ITPR3

MAPK14

PIK3CB

PLCG2

PTK2B

RND3

NFKB2

D

AKT3

CAMK2B

F2RL2

GNA12

GNB3

KRAS

MAPK3

PIK3CD

PPP1R12A

RAF1

ROCK1

PLCB2

E

ARHGEF1

CAMK2G

F2RL3

GNA13

GNG2

MAP2K1

MYL9

PIK3R1

PRKCA

REL

ROCK2

PRKCE

F

ARHGEF11

CAMK4

FYN

GNAI1

GRB2

MAP2K2

MYLK

PIK3R2

PRKCB

RELA

RPS6KB1

RHOA

G

ARHGEF2

EGF

GATA1

GNAI2

HRAS

MAPK1

NFKB1

PLCB1

PRKCD

RELB

RRAS

RRAS2

H

ARHGEF6

EGFR

GATA2

GNAI3

IKBKB

MAPK11

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.