产品介绍：

     紧密连接（TJ）对于建立选择性渗透屏障以通过相邻细胞之间的细胞旁空间进行扩散至关重要。TJs由至少三种类型的跨膜蛋白组成-闭塞蛋白、克劳丁和连接粘附分子（JAMs）-以及由许多不同蛋白质组成的细胞质“斑块”，形成大型复合体。这些被认为涉及连接组装、屏障调节、细胞极性、基因转录和其他途径。

紧密连接将相邻的上皮细胞密封在一起，阻止大多数溶解分子以及膜结合脂质和蛋白质在顶端和基底外侧表面之间通过。保持紧密连接上皮细胞的这种分离在环境和哺乳动物有机体内部或内部隔间之间形成屏障。一些例子包括血脑屏障、血管、肠道、肾单位和皮肤。组织和器官系统的发育需要正确形成紧密连接。正常的生物过程，如免疫细胞外渗/渗出和肠道吸收，需要正确组装、拆卸和维持紧密连接。紧密连接完整性和功能的失调在炎症性肠病和肿瘤转移期间上皮间质转化等疾病的病理生理学中起着关键作用。紧密连接的核心成分包括claudins、ocludin和其他细胞粘附蛋白。它们的胞外域与其他细胞表面蛋白进行同源和/或异嗜性相互作用，而它们的胞内域与衔接蛋白（如肌动蛋白、连环蛋白和其他连接相互作用蛋白）相互作用。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Tight Junctions PCR Array plate
种    属：	RAT
货    号：	WC-MRNA0150-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

RAT

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Actn1

Cdk4

Cldn15

Cldn5

Csnk2a1

Esam

Icam2

Mark2

Pard3

Rhoa

Sympk

Tjp3

B

Actn3

Cdx1

Cldn16

Cldn6

Csnk2a2

F11r

Ilk

Mllt4

Pard6a

Snai1

Tbp

Vapa

C

Actn4

Cdx2

Cldn17

Cldn7

Csnk2b

Gnai1

Itgb1

Mpdz

Pard6b

Spta1

Tcf7l1

Magi3

D

Amotl1

Cldn1

Cldn18

Cldn8

Ctnna2

Gnai2

Jam3

Mpp5

Pecam1

Sptan1

Tcf7l2

Ocln

E

Arhgef2

Cldn10

Cldn19

Cldn9

Ctnnb1

Gsk3a

Llgl1

Mpp6

Prkci

Sptb

Tiam1

Rac1

F

Ash1l

Cldn11

Cldn2

Crb1

Cttn

Gsk3b

Llgl2

Myl12a

Prkcz

Sptbn1

Tjap1

Sptbn4

G

Cdc42

Cldn12

Cldn3

Crb3

Epb41l1

Hcls1

Magi2

Myl12b

Pten

Sptbn2

Tjp1

Tjp2

H

Cdh5

Cldn14

Cldn4

Csda

Epb41l3

Icam1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）	相关基因
细胞表面受体 紧密连接蛋白	Cldn1,Cldn10,Cldn11,Cldn12,Cldn14,Cldn15,Cldn16,Cldn17,Cldn18,Cldn19,Cldn2,Cldn3, Cldn4,Cldn5,Cldn6,Cldn7,Cldn8,Cldn9
细胞粘附分子	Esam,Icam1,Icam2,Pecam1
连接粘附分子	F11r,Jam3
其他细胞表面受体	Cdh5,Crb1,Crb3
α-肌动蛋白和连环蛋白	Actn1,Actn3,Actn4,Ctnna2,Ctnnb1.
连接相关蛋白	Actn1,Actn3,Actn4,Amotl1,Cttn,Epb41l1,Epb41l3,Hcls1,Magi2,Magi3,Mpdz,Pard3,Sympk,Tjap1,Tjp1,Tjp2,Tjp3,Vapa,Ybx3
细胞骨架调节因子	Amotl1,Ash1l,Cttn,Llgl1,Llgl2,Pard3,Pard6a,Pard6b,Smurf1,Spta1,Sptan1,Sptb,Sptbn1, Sptbn2,Sptbn4,Tiam1,Ybx3
G蛋白信号	Arhgef2,Cdc42,Cdk4,Gnai1,Gnai2,Rac1,Rhoa,Smurf1,Tiam1
蛋白激酶信号	Csnk2a1,Csnk2a2,Csnk2b,Gsk3a,Gsk3b,Ilk,Magi2,Magi3,Mark2,Mpp5,Mpp6,Prkci,Prkcz,Pten

紧密连接通路图

 

 

图片来源于： https://www.kegg.jp/pathway/map04530

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.