产品介绍：

       器官移植是治疗终末期器官衰竭的首选方法，其成功的主要障碍仍然是由受体对移植的免疫反应引起的器官排斥。在急性排斥反应期间，由于隔离、取回和缺血再灌注而产生的组织损伤 激活了先天性免疫系统的元素，然后启动并扩大了适应性免疫反应。不加控制的先天性和适应性免疫反应会导致移植细胞、组织和器官的破坏和死亡。即使细胞或抗体介导的免疫可能在急性排斥过程中占主导地位，但多种排斥机制在排斥中发挥着综合作用。不明确的免疫学和非免疫学机制都通过引起纤维化组织重塑和血管损伤而导致慢性排斥。在急性和慢性移植排斥过程中，导致组织破坏的分子途径的作用和关系仍未完全了解。识别引发组织损伤、信号转导和排斥的分子途径，有利于确定开发新的免疫抑制策略的目标。免疫抑制策略和评估现有策略的有效性。该阵列分析了介导急性排斥反应的关键先天和适应性免疫反应基因的表达，以及在慢性排斥反应期间负责纤维化和血管通透性的基因。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Transplant Rejection PCR Array plate
种    属：	MOUSE
货    号：	WC-MRNA0152-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

MOUSE

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Adam17

Ccl2

Cd14

Col1a2

Cxcr3

Hspa1b

Il2

Itgam

Nos2

Stat4

Thbs2

Vcam1

B

Bmp7

Ccl3

Cd28

Csf2

Cxcr4

Icam1

Il2ra

Mmp1a

Pecam1

Stat6

Timp1

Vegfa

C

C3

Ccl4

Cd40

Ctgf

Fas

Ifng

Il3

Mmp1b

Prf1

Tap1

Tlr3

Itgae

D

C4b

Ccl5

Cd40lg

Ctla4

Fasl

Il10

Il4

Mmp2

Psmb9

Tbp

Tlr4

Nfkb1

E

Casp1

Ccr2

Cd44

Cx3cr1

Fgfr2

Il12a

Il5

Mmp7

Slc6a1

Tgfb1

Tlr9

Stat1

F

Casp3

Ccr3

Cd80

Cxcl10

Gzma

Il13

Il6

Mmp9

Slc6a2

Tgfb2

Tnf

Thbs1

G

Casp8

Ccr5

Cd86

Cxcl9

Gzmb

Il16

Itga2

Ms4a1

Sod1

Tgfb3

Tnfaip3

Tnfsf10

H

Ccl11

Ccr7

Cd8a

Cxcr2

Hspa1a

Il1b

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Mouse）		相关基因
急性排斥反应--先天性免疫	模式识别受体	Tlr3,Tlr4,Tlr9.
	细胞因子	Ccl11,Ccl2 ,Ccl4 ,Ccl5,Csf2 ,Ctla4,Cxcl10 ,Ifng,Il10,Il12a,Il13,Il16,Il1b,Il2,Il2ra ,Il3,Il4,Il5,Il6,Tnf.
	其他先天免疫力基因	Adam17 ,C3,C4b,Casp1,Casp3,Casp8 ,Ccr2,Ccr3,Cd14,Cd28,Cd8a,Fas,Fasl,Gzma,Gzmb,Ms4a1,Nfkb1,Nos2 ,Prf1,Psmb9,Stat1,Stat6,Tap1,Tnfaip3,Tnfsf10
急性排斥反应 - 适应性免疫	Th1标志物与免疫反应	Ccr5,Ccr7,Cd80,Cxcr2,Cxcr3,Ifng,Stat4.
	Th2标志物与免疫反应	Cd86,Il10,Il13,Il4,Il5,Il6.
	T-细胞激活	Cd80,Cd86,Icam1,Ifng
	白细胞招募	Cd40,Cd40lg,Icam1,Thbs1,Vcam1.
慢性排斥反应	促进纤维化	Ccl3,Ccn2,Il13,Il4,Il5.
	抗纤维化	Bmp7,Col1a2,Ifng,Il10,Thbs2.
	细胞粘附分子	Icam1,Itga2,Itgae,Itgam,Vcam1.
	细胞浸润	Bmp7,Ccr2,Cd44,Col1a2,Cx3cr1,Cxcl9,Cxcr4,Mmp1a,Mmp1b,Mmp2,Mmp7,Mmp9,Pecam1, Tgfb1,Tgfb2,Tgfb3,Thbs2,Timp1,Vegfa.

移植排斥反应通路图：

图片来源于：https://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?map05330

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.