产品介绍

      结核病是由结核分枝杆菌引起的一种传染病。世界上三分之一的人口被认为感染了结核病。约90%的感染者会导致潜在感染，约10%的潜在感染者在因年龄、艾滋病等其他疾病或接触免疫抑制药物而导致免疫系统受损时会发展为活动性疾病。结核病通过空气传播，主要侵袭肺部，然后通过循环系统传播到身体其他部位。一旦结核杆菌通过呼吸途径进入宿主并感染肺部的巨噬细胞，它们就会干扰吞噬体成熟、抗原呈递、细胞凋亡和宿主免疫系统，从而建立持续或潜在的感染。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Tuberculosis PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0248-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表 

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ADRB2

C1QA

CORO1A

EIF2AK3

GZMB

IFNG

KLRK1

PERP

RAB24

SPP1

TLR1

WARS

B

AIFM1

C1QB

CSE1L

ERCC5

HAMP

IL10

MAGEA2

PHF17

RABEP1

STAT1

TLR2

WRN

C

BCLAF1

CCL2

CTSZ

F2R

HIF1A

IL12B

MAGEH1

PIK3AP1

SERPINA1

STAT5A

TLR4

PARK7

D

BIRC3

CD160

CUL4A

FASLG

IDO1

IL1B

MALT1

POU2AF1

SERPING1

TAPBP

TNF

PYCARD

E

BNIP3

CD28

CXCR1

FOXP3

IFI16

IRF7

NR2C2

PPARG

SIAH1

TBP

TPM1

SP110

F

BNIP3L

CEBPB

CXCR4

GBP1

IFI27

ISG15

NUP62

PRF1

SIRT1

TCIRG1

TRAF5

TGFB1

G

BPI

CEBPE

DNAJB6

GBP2

IFI6

KLF2

OAS1

PXN

SON

TFF2

TRIM21

TRIM22

H

BTG1

CLU

DNASE1L3

GZMA

IFIT3

KLRC3

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

结核病通路图：

  图片来源于：https://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?map05152

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.