产品介绍：

   胰岛素抗性与II型糖尿病密切相关。包括FFA、TNFα和细胞应激在内的“糖尿病原性”因子通过抑制IRS1功能诱导胰岛素抗性。丝氨酸/苏氨酸磷酸化、与SOCS的相互作用、表达的调节、细胞定位的修饰和降解代表了它们刺激的分子机制。各种激酶（ERK、JNK、IKKβ、PKCzeta、PKCtheta和mTOR）都参与了这一过程。II型糖尿病的发展需要受损的β细胞功能。慢性高血糖已被证明可诱导β细胞的多种缺陷。高血糖被认为会导致β细胞中大量的活性氧（ROS），随后对包括PDX-1在内的细胞成分造成损伤。胰岛素启动子活性的关键调节因子PDX-1的缺失也被认为是导致β细胞功能障碍的重要机制。尽管遗传因素在II型糖尿病中的重要性毋庸置疑，但由于多种易感基因之间以及遗传因素和环境因素之间的复杂相互作用，遗传分析很困难。因此，遗传学研究得出了非常不同的结果。Kir6.2和IRS是两个候选基因。众所周知，Kir6.2和IRS分别在胰岛素分泌和胰岛素信号传递中发挥核心作用。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Type II diabetes mellitus PCR Array
种    属：	RAT
货    号：	wc-mRNA0234-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

RAT

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ABCC8

GCK

IRS1

MAPK8

PIK3R2

SLC2A4

ABCC8

GCK

IRS1

MAPK8

PIK3R2

SLC2A4

B

ADIPOQ

HK1

IRS2

MAPK9

PIK3R3

SOCS1

ADIPOQ

HK1

IRS2

MAPK9

PIK3R3

SOCS1

C

CACNA1A

HK2

IRS4

MTOR

PKLR

SOCS2

CACNA1A

HK2

IRS4

MTOR

PKLR

SOCS2

D

CACNA1B

HK3

KCNJ11

PDX1

PKM

SOCS3

CACNA1B

HK3

KCNJ11

PDX1

PKM

SOCS3

E

CACNA1C

HKDC1

MAFA

PIK3CA

PRKCD

SOCS4

CACNA1C

HKDC1

MAFA

PIK3CA

PRKCD

SOCS4

F

CACNA1D

IKBKB

MAPK1

PIK3CB

PRKCE

TNF

CACNA1D

IKBKB

MAPK1

PIK3CB

PRKCE

TNF

G

CACNA1E

INS

MAPK10

PIK3CD

PRKCZ

ACTB

CACNA1E

INS

MAPK10

PIK3CD

PRKCZ

ACTB

H

CACNA1G

INSR

MAPK3

PIK3R1

SLC2A2

GAPDH

CACNA1G

INSR

MAPK3

PIK3R1

SLC2A2

GAPDH

2型糖尿病通路图：

图片来源于：https://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?map04930

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.