产品介绍：

        VEGF信号在血管的形成和生长中起关键作用。在新血管的形成过程中，VEGF与基因表达的诱导、血管通透性的调节以及细胞迁移、增殖和存活的促进有关。VEGF信号通过VEGF配体与其同源膜结合物的结合来诱导受体，导致多个下游通路的激活。

       沃吉基因VEGF信号PCR阵列包含生长因子和受体，信号转导途径中的细胞内激酶和磷酸酶，以及转录因子等关键的90个基因。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	VEGF Signaling PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0156-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Akt1

Cdc42

Hras1

Map2k2

Nfat5

Nras

Pik3cg

Pla2g1b

Pla2g6

Prkca

Rela

Vegfb

B

Akt2

Chuk

Hsp90aa1

Mapk1

Nfatc1

Nrp1

Pik3r1

Pla2g2d

Plcg1

Prkcb

Sh2d2a

Vegfc

C

Akt3

Esr1

Hspb1

Mapk11

Nfatc2

Nrp2

Pik3r2

Pla2g2e

Plcg2

Ptgs2

Shc2

Pla2g12b

D

Arnt

Figf

Ikbkb

Mapk12

Nfatc3

Pdgfc

Pik3r3

Pla2g2f

Ppp3ca

Ptk2

Sphk1

Pla2g5

E

Bad

Flt1

Ikbkg

Mapk13

Nfatc4

Pgf

Pik3r5

Pla2g3

Ppp3cb

Pxn

Sphk2

Ppp3r2

F

Casp9

Flt4

Kdr

Mapk14

Nfkb1

Pik3ca

Pla2g10

Pla2g4a

Ppp3cc

Rac1

Src

Raf1

G

Cav1

Grb2

Kras

Mapk3

Nfkb2

Pik3cb

Pla2g12a

Pla2g4b

Ppp3r1

Rac2

Tbp

Vegfa

H

Cd63

Hif1a

Map2k1

Mapkapk2

Nos3

Pik3cd

Actb

Gapdh

Hprt1

B2m

NTC

NTC

基因分类（mouse）	相关基因
生长因子和受体	Flt1 ,Flt4 ,Kdr ,Nrp1,Nrp2,Pdgfc,Pgf,Vegfa,Vegfb,Vegfc,Vegfd .
AKT & PI3k信号转导	Akt1,Akt2,Akt3,Chuk,Pik3ca ,Pik3cb,Pik3cd,Pik3cg,Pik3r1 ,Pik3r2 ,Pik3r3,Pik3r5,Rela.
MAP激酶信号	Map2k1 ,Map2k2 ,Mapk1 ,Mapk11 ,Mapk12 ,Mapk13 ,Mapk14 ,Mapk3 ,Mapkapk2,Nfkb1,Nfkb2,Ikbkb,Ikbkg
NFAT信号	Nfat5,Nfatc1,Nfatc2,Nfatc3,Nfatc4 .
Small G-Protein信号	Hras,Kras,Nras,Rac1,Rac2,Raf1,Shc2,Src.
蛋白激酶C	Prkca,Prkcb.
蛋白磷酸酶	Ppp3ca,Ppp3cb,Ppp3cc,Ppp3r1,Ppp3r2.
磷脂酶	Pla2g10,Pla2g12a,Pla2g12b,Pla2g1b,Pla2g2d,Pla2g2e,Pla2g2f,Pla2g3,Pla2g4a,Pla2g4b,Pla2g5,Pla2g6,Plcg1,Plcg2.
热蛋白	Hsp90aa1,Hspb1 .
细胞凋亡和细胞周期	Bad,Casp9,Cdc42.
细胞迁移与形态学	Ptk2 ,Pxn.
转录因子	Arnt,Hif1a,Nfat5,Nfatc1,Nfatc2,Nfatc3,Nfatc4 .
其他 VEGF 信号基因	Cav1,Cd63,Esr1,Grb2,Nos3 ,Ptgs2 ,Sh2d2a,Sphk1,Sphk2.

VEGF Signaling通路图

图片来源于：https://www.genome.jp/pathway/map04370

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.