产品介绍:

       Wnt蛋白是许多不同物种和器官中基本发育过程所需的分泌形态发生素，至少存在三种不同的Wnt途径：经典途径、平面细胞极性(PCP)途径和Wnt/Ca2+途径。在经典Wnt通路中，Wnt配体与其受体结合的主要作用是通过抑制β-连环蛋白降解复合物来稳定细胞质β-连环蛋白。然后，β-连环蛋白可以自由进入细胞核并通过其与TCF（T细胞因子）家族转录因子的相互作用以及伴随的辅激活因子募集来激活Wnt调节基因。平面细胞极性(PCP)信号传导导致小GTP酶RHOA和RAC1的激活，从而激活应激激酶JNK和ROCK并导致细胞骨架的重塑和细胞粘附和运动的变化。WNT-Ca2+信号通过G蛋白和磷脂酶介导，导致细胞质游离钙的瞬时增加，随后激活激酶PKC和CAMKII和磷酸酶钙调神经磷酸酶。

      沃吉基因Wnt信号PCR阵列包含三种途径的 WNT 信号配体和受体以及其他下游信号分子，还包括 WNT 信号调节基因以及下游靶基因的关键90个基因。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

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品    名：	WNT Signaling PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0262-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Aes

Ccnd2

Dab2

Fbxw4

Fzd4

Kremen1

Nkd1

Rhou

Tbp

Wisp1

Wnt3a

Wnt8b

B

Apc

Cd44

Dixdc1

Fgf4

Fzd5

Lef1

Nlk

Ruvbl1

Tcf7

Wnt1

Wnt4

Wnt9a

C

Axin1

Csnk1a1

Dkk1

Fosl1

Fzd6

Lrp5

Pitx2

Sfrp1

Tcf7l1

Wnt10a

Wnt5a

Sox17

D

Axin2

Csnk2a1

Dkk3

Foxn1

Fzd7

Lrp6

Porcn

Sfrp2

Tle1

Wnt11

Wnt5b

Rhoa

E

Bcl9

Ctbp1

Dvl1

Frzb

Fzd8

Mapk8

Ppard

Sfrp4

Vangl2

Wnt16

Wnt6

Wif1

F

Bmp4

Ctnnb1

Dvl2

Fzd1

Fzd9

Mmp7

Prickle1

Snai1

Vegfa

Wnt2

Wnt7a

Wnt3

G

Btrc

Ctnnbip1

Ep300

Fzd2

Gsk3b

Myc

Pygo1

Snai2

Vim

Wnt2b

Wnt7b

Wnt8a

H

Ccnd1

Daam1

Fbxw11

Fzd3

Jun

Nfatc1

Actb

Gapdh

Hprt1

B2m

NTC

NTC

基因分类（mouse）	相关基因
经典wnt信号通路	Aes ,Apc,Axin1,Axin2,Bcl9,Bmp4,Csnk1a1,Csnk2a1,Ctbp1,Ctnnb1,Ctnnbip1 ,Cd44,Dixdc1,Dkk1,Dkk3,Dvl1,Dvl2,Ep300,Fzd1,Fzd2, Fzd3,Fzd4,Fzd5,Fzd6,Fzd7,Fzd8,Fzd9,Gsk3b,Lef1,Lrp5,Lrp6,Nkd1,Porcn,Pygo1,Ruvbl1,Sfrp1,Sfrp2,Sfrp4,Sox17,Tcf7,Tcf7l1,Wif1, Wnt1,Wnt10a,Wnt16,Wnt2,Wnt2b,Wnt3,Wnt3a,Wnt4,Wnt6,Wnt7a,Wnt7b,Wnt8a,Wnt8b.
平面细胞极性(PCP)途径	Daam1,Dvl1,Dvl2,Mapk8 ,Nkd1,Prickle1,Rhoa,Rhou,Vangl2,Wnt9a.
Wnt/Ca2+途径	Fzd2,Nfatc1,Wnt1,Wnt10a,Wnt11,Wnt16,Wnt2,Wnt2b,Wnt3,Wnt3a,Wnt4,Wnt5a,Wnt5b,Wnt6,Wnt7a,Wnt7b,Wnt8a,Wnt9a.
WNT 信号负调控	Apc,Axin1,Axin2,Btrc ,Ccnd1,Ctbp1,Ctnnbip1 ,Dkk1,Dkk3,Fbxw11,Fbxw4,Frzb ,Kremen1,Lrp6,Nkd1,Nlk,Sfrp1,Sfrp2,Sfrp4,Sox17 ,Tle1,Wif1.
WNT 信号转导靶基因	Axin2,Btrc ,Ccn4,Ccnd1,Ccnd2,Dab2,Fosl1 ,Jun,Mmp7,Myc,Pitx2,Ppard.
细胞迁移	Apc,Dkk1,Lrp5,Lrp6,Rhoa,Wnt1.
细胞周期	Apc,Btrc ,Ccnd1,Ccnd2,Ctnnb1,Ep300,Fosl1 ,Jun,Myc,Rhoa,Rhou,Ruvbl1,Tcf7l1.
细胞稳态	Apc,Fzd2,Jun,Myc.
细胞发展过程	Ctnnb1,Dkk1,Wnt1,Wnt3,Wnt3a.Axin2,Fzd2,Fzd3,Fzd5,Fzd6,Vangl2.Apc,Ccn4,Ccnd1,Ccnd2,Ctbp1,Ctnnb1,Ctnnbip1 ,Dab2, ep300,Fgf4,Fosl1 ,Foxn1,Fzd3,Jun,Lrp5,Mmp7,Myc,Ppard,Wnt3a.Snai1,Snai2

Wnt Signaling通路图

图片来源于：https://www.genome.jp/pathway/map04310

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.