产品介绍：

       WNT分泌的生长因子家族调节发育和分化以及一般细胞维持过程，例如迁移和细胞周期调节。WNT配体与卷曲(FZD)受体家族成员结合并激活三种WNT途径之一：经典途径、平面细胞极性(PCP)途径和Wnt/Ca2+途径。

       沃吉基因Wnt信号靶PCR阵列包括经典信号通路转录因子和通过多项研究确定的高度相关的靶基因关键的90个基因。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	WNT Signaling Targets PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0161-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Abcb1a

Ahr

Angptl4

Antxr1

Axin2

Bglap

Birc5

Bmp4

Btrc

Cacna2d3

Ccnd1

Ccnd2

B

Cd44

Cdh1

Cdkn2a

Cdon

Cebpd

Cldn1

Crebbp

Ctgf

Cubn

Dab2

Dkk1

Dlk1

C

Dpp10

Efnb1

Egfr

Egr1

Enpp2

Ets2

Fgf20

Fgf4

Fgf7

Fgf9

Fn1

Fosl1

D

Fst

Gdf5

Gdnf

Gja1

Gsk3b

Id2

Igf1

Igf2

Il6

Irs1

Jag1

Klf5

E

Lef1

Lrp1

Met

Mmp2

Mmp7

Mmp9

Myc

Nanog

Nrcam

Nrp1

Ntrk2

Pdgfra

F

Pitx2

Plaur

Pou5f1

Ppap2b

Ppard

Ptch1

Ptgs2

Rhoa

Runx2

Sfrp2

Six1

Smo

G

Snai1

Snai2

Sox2

Sox9

Tbp

Tcf3

Tcf4

Tcf7

Tcf7l2

Tgfb3

Tle1

Twist1

H

Vegfa

Wisp1

Wisp2

Wnt3a

Wnt5a

Wnt9a

Actb

Gapdh

Hprt1

Ubb

NTC

NTC

基因分类（Rat）	相关基因
分化与发育	Angptl4,Bmp4,Ccn2,Fgf20,Fgf4,Fgf9,Gdf5 ,Gdnf,Igf1,Igf2,Il6,Jag1,Tgfb3,Vegfa.Cdkn2a ,Egr1,Nanog,Pou5f1 ,Ppard,Runx2,Six1,Sox2,Sox9,Antxr1,Ccnd1,Ccnd2,Cdh1 ,Cdon,Dab2,Dlk1,Efnb1,Egfr,Fn1,Fst,Gja1 ,Id2,Met,Mmp9,Nrcam,Nrp1,Ntrk2,Pdgfra,Smo,Twist1.
信号转导	Axin2,Btrc ,Ccn4,Ccn5,Dkk1,Fgf9,Lef1,Lrp1,Plpp3,Sfrp2,Tle1,Wnt3a,Wnt5a,Wnt9a.Bmp4,Fst,Gdf5 ,Id2,Tgfb3.Ptch1,Smo.Jag1.
转录因子	Lef1,Tcf7,Tcf7l1,Tcf7l2.Ahr,Cdkn2a ,Cebpd,Egr1,Ets2,Fosl1 ,Klf5,Myc,Nanog,Pitx2,Pou5f1 ,Ppard,Runx2,
钙结合和信号传导	Bglap,Cacna2d3,Ccnd1,Cubn,Egfr,Lrp1,Mmp2,Mmp7,Mmp9,Ptgs2 ,Wnt3a,Wnt5a,Wnt9a.
细胞粘附分子	Abcb1a ,Bglap,Ccn2,Cd44,Cdh1 ,Egfr,Fgf4,Nrcam,Sox9.
细胞迁移	Ccn2,Cd44,Efnb1,Egfr,Enpp2,Fgf7,Fn1,Gdnf,Igf1,Il6,Irs1,Jag1,Mmp9,Nrcam,Nrp1,Pdgfra,Plpp3,Ppard,Six1,Smo,Twist1,Vegfa.
细胞周期	Ahr,Birc5,Ccnd1,Ccnd2,Cdkn2a ,Egfr,Fosl1 ,Id2,Igf1,Igf2,Myc,Ptgs2 ,Sox2.
蛋白酶	Dpp10,Mmp2,Mmp7,Mmp9,Plaur .

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.