产品介绍：

       p53激活是由许多应激信号诱导的，包括DNA损伤、氧化应激和活化的癌基因。p53蛋白用作p53调节基因的转录激活因子。这导致了三个主要产出；细胞周期停滞、细胞衰老或凋亡。其他p53调节的基因功能与相邻细胞沟通，修复受损的DNA或建立正负反馈回路，增强或减弱p53蛋白的功能，并将这些应激反应与其他信号转导途径整合。

       沃吉基因p53信号通路PCR阵列包含与细胞凋亡、细胞周期、细胞生长、增殖和分化以及 DNA 修复过程有关的 p53 相关的关键的90个基因。

       WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	p53 Signaling Pathway PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0117-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Apaf1

Apex1

Atm

Atr

Bag1

Bax

Bbc3

Bcl2

Bid

Birc5

Bnip3

Brca1

B

Brca2

Btg2

Casp2

Casp9

Ccnb1

Ccne1

Ccne2

Ccng1

Ccng2

Ccnh

Cdc25a

Cdc25c

C

Cdk1

Cdk4

Cdkn1a

Cdkn2a

Chek1

Chek2

Cradd

Cul9

Dapk1

Dnmt1

E2f1

E2f3

D

Egfr

Egr1

Ep300

Ercc1

Esr1

Fadd

Fas

Fasl

Foxo3

Gadd45a

Gadd45g

Hif1a

E

Igf1r

Il6

Jun

Kras

Lig4

Mcl1

Mdm2

Mdm4

Mlh1

Msh2

Myc

Myod1

F

Nf1

Nfkb1

Pcna

Pias1

Pmaip1

Ppm1d

Prc1

Prkca

Pten

Pttg1

Rb1

Rela

G

Rprm

Serpinb5

Sesn2

Sfn

Sirt1

Stat1

Tbp

Tnf

Tnfrsf10b

Traf1

Trp53

Trp53bp2

H

Trp63

Trp73

Wt1

Xrcc4

Xrcc5

Zmat3

Actb

Gapdh

Hprt1

B2m

NTC

NTC

基因分类（mouse）	相关基因
p53活化	Atm,Atr,Bbc3,Brca1,Cdkn1a ,Cdkn2a ,Chek1,Chek2 ,Ep300,Foxo3,Mdm2,Msh2,Pmaip1 ,Sirt1,Trp63 ,Trp73
p53 调控因子	Cdkn2a ,Dnmt1,Mdm2,Mdm4,Sirt1,Trp53bp2,Trp63 ,Trp73
p53靶基因（凋亡，周期，DNA 损伤与修复）	Apaf1,Bax,Bbc3,Brca1,Btg2,Casp9,Ccng1,Ccng2,Cdc25a,Cdc25c,Cdkn1a ,E2f1,E2f3,Egfr,Esr1 ,Fas, Gadd45a,Il6,Mdm2,Myc,Pcna,Pmaip1 ,Ppm1d ,Prkca,Pten,Pttg1,Rb1,Rprm,Serpinb5 ,Sesn2,Sfn ,Tnf,Tnfrsf10b , Trp53 ,Trp73,Zmat3
p53 信号下游的反应（凋亡，周期，DNA 损伤与修复，转录因子）	Apaf1,Apex1,Bag1,Bcl2,Bid,Birc5,Bnip3,Brca2,Casp2,Casp9,Ccnb1,Ccne1,Ccne2,Ccng1,Ccnh,Cdk1 ,Cdk4, Cradd,Cul9,Dapk1,Egr1,Ercc1,Fadd,Fasl,Hif1a,Jun,Kras,Lig4,Mcl1,Mlh1,Myod1,Nf1,Nfkb1,Prc1,Rela,Stat1,Traf1, Wt1,Xrcc4,Xrcc5,Igf1r.

p53 Signaling Pathway通路图:

 

图片来源于：https://www.genome.jp/pathway/map04115#

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.